腎マクラデンサの血管側Na-K-Cl輸送体及び管腔側Clチャネルのクローニング

肾黄斑血管Na-K-Cl转运蛋白和管腔Cl通道的克隆

• 批准号: 07671266
• 负责人: 長谷川 元
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Jikei University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07671266/
• 关键词: Na-K-2Cl cotransporter; macula densa; tubuloglomerular feedback; in situ hybridization; molecular cloning

(1)既に明らかにされているNa-K-2Cl(NKCC)cotransporter family及びthiazide sensitive NaCl cotransporter(TSC)の塩基配列より保存性が高くかつ膜貫通部位と思われる5箇所を選びPCR primerを4通り作製した。(2)ラット腎皮質及び腎髄質より得たmRNAよりcDNAプールを作製した。(3)これと先に作製したPCR primerとでNKCC類似の塩基配列を持つDNA fragmentを増幅した。(4)得られた断片をサブクローニングし、約120のDNA断片について制限酵素切断パターンを検討した。(5)既知のNKCC familyと異なるパターンを示したものをprobeとして腎髄質cDNAを検討し、ほぼ腎皮質特異的と思われる断片を特定した。(6)現在上記の断片のsequencingおよびmacula densaでの局在を確認するため、PCR-in situ hybridizationを行い、検討中である。

(1) choose PCR primer (NKCC) cotransporter family and thiazide sensitive NaCl cotransporter (TSC) as well as select PCR primer 4 as the key to the preservation of the membrane. (2) mRNA the cDNA and make sure that you don't know what to do. (3) the PCR primer NKCC type is similar to that of the basic configuration column that holds the DNA fragment amplitude. (4) the DNA fragments were cut, and the enzyme was cut off. (5) it is known that the fragments of NKCC family, probe, cDNA, skin, skin and skin are specific. (6) now in the last section of the sequencing, the macula densa office is in the confirmation section, the PCR-in situ hybridization line, and the window.