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ナノテクノロジーによる超微小HPLCの作製とプロテオーム高速解析系への適用

利用纳米技术构建超小型高效液相色谱仪及其在高速蛋白质组分析系统中的应用

基本信息

批准号：
14655309
负责人：
植田充美
金额：
$ 1.86万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

既知のDNA情報を機能タンパク質に変換したり、ランダムなDNA情報からこれまでに存在しなかったタンパク質を創製したりする潜在的な能力のある技術である細胞表層デイスプレイという分子ツールを開発し、これを用いたコンビナトリアル・バイオエンジニアリングを展開してきた。遺伝子のコードするタンパク質のこれまでの発現系は、タンパク質を純粋にとりだすためには、細胞を破砕したり濃縮したり、種々のカラムクロマトグラフィー操作も必要とする。一方、細胞の表層にタンパク質を発現デイスプレイする系では、デイスプレイされた細胞を一つの支持体として、提示されたタンパク質の機能解析ができ、タンパク質のアミノ酸配列分析を待たずに、PCR法などの併用により、導入されたDNAの配列から提示されたタンパク質のアミノ酸配列が決定できる。このように、細胞表層デイスプレイの手法は、DNA情報と機能タンパク質との解析のいわゆる距離を一気に短縮させた。また、ナノテクノロジーによって開発されたゾル・ゲル法によるシリカ一体型モノリス担体がHPLCをキャピラリー化できることがわかったので、この特性を利用して微小化HPLCの作製を行い、ハイスループットデバイスを作製した。一方、種々の細胞のmRNAから作製したcDNAなどを鋳型にして、ランダムなプライマーやエラーの多いポリメラーゼを用いてランダムなDNAライブラリーを作製し、【酵母細胞表層デイスプレイ(Cell Surface Engineering)】技術を用いて、細胞表層に機能性タンパク質分子ライブラリーとして提示した、いわゆるタンパク質ライブラリーを調製することに成功した。このタンパク質ライブラリーの活性検索を微小化HPLCで行うための最適化を行なった。

It is well known that the DNA information system is responsible for the development of high-performance and low-cost equipment. Since it is known that there is a significant increase in the potential ability of the DNA information system, there is a significant increase in the number of potential problems in the development of the system. Please do not know if it is necessary for the operation of the system, the system, the cell or the cell. On the one hand, the cell table shows that the system is in the system, the cell is in support of the system, and the hint is that the machine is capable of analyzing the data, the computer is used to analyze the distribution of acid, and the PCR method is used to analyze the distribution of acid. Enter the "DNA" column "prompt" to determine the acid column. The information on the computer, the information on the cell, the manipulation of the information, and the information on the DNA can be used to analyze the distance between the data and the data. Do you know that you can use the miniaturized HPLC to make you feel better? you can use the miniaturized HPLC to make full use of the information. One party, one kind of cell, mRNA, one, one, two, two, one, two, one, one, two, one, one, two, one, I don't know. I don't know. I don't know. This is the best way to minimize the size of the HPLC and optimize the performance.