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魚類の生殖細胞移植に関する基礎的研究

鱼类生殖细胞移植基础研究

基本信息

批准号：
14656076
负责人：
STRUSSMANN C.A.
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tokyo University of Marine Science and Technology (2004)東京水産大学 (2002-2003)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

生殖細胞移植では、ホストの生殖腺にドナーの生殖細胞を移植し、ホストは代理父または代理母として配偶子を形成する。この技術は、例えば、マグロのように従来飼育が困難な種類、または繁殖が不可能な種類の種苗生産を、容易に飼育できる種類を介して実現する手法として考えられる。また、優れた形質を持つ個体の大量生産や系統保存・復活など、育種の手法としても多様な応用が期待できる。本研究は、魚類の生殖細胞の可能性を検討し、実用的移植技術を考案することを目的とする。本年度は、移植に適した生殖細胞の精製方法及び異種間での移植手術法を検討した。昨年度の結果から得られた知見をもとにパタゴニアペヘレイの生殖腺をトリプシン酵素処理した後、パーコール密度勾配を用いて遠心分離することで、注射液1μl当たり約10個にまで生殖細胞が単離できることが示された。ペヘレイをホストとして麻酔下で開腹手術を行い、これらの生殖細胞をマイクロインジェクションによって生殖腺へと移植した。移植後、ホストの生殖腺を摘出しドナー細胞に施した生体蛍光染色によって4週間後までの生存が確認された。これらと平行し、開腹手術を伴わずに移植後の細胞の生存・増殖を観察することを目的としたモデルの開発も行った。ホストにシースルーST-III系統のメダカを用い、ドナーに生殖細胞のみが蛍光を発するGFP-OLVAS系統を用いることで生殖腺の摘出を行わず、外部から移植後の細胞を追跡できる個体の作出に成功した。また移植後の観察から、ドナー細胞の数が移植後1週間で移植時の70%まで低下したが、1ヵ月後には400%にまで増加することが確認された。さらに、割球が生殖腺に移植されることで生殖細胞に誘導されるか検討するために、メダカ割球をペヘレイの生殖腺に移植し、10日間生存することが免疫組織学的手法により示された。

Reproductive cell transplantation, gonad transplantation, reproductive cell transplantation, surrogate parent, surrogate mother, gamete formation. Technology, examples, and techniques are used to educate poor animals, it is not possible to breed and breed, and it is easy to learn how to do this. In the form of medical equipment, a large number of biological systems are used to preserve live animals and breed methods to improve the quality of life. In this study, the possibility of reproductive cancer cells is very important, and the purpose of the examination of transplantation techniques and techniques used is very important. This year, we will use the method of cell purification of reproductive cells and the method of inter-cell transplantation for this year's transplantation. According to the results of the last year, it was found that after the treatment of the enzyme in the gonad of the mother, the density of the product was separated by the concentration of the enzyme, and the injection of 1 μ l was used to separate the germ cell from the genitalium. when the concentration was 1 μ l, about 10 reproductive cells were isolated. Under the anesthesia, laparotomy was performed, and reproductive cells were required to undergo laparotomy and gonadal transplantation. After transplantation, the gonads were removed and the cells were stained with light staining. After 4 weeks of transplantation, the survival rate was confirmed. Parallel laparotomy and laparotomy were performed in conjunction with transplantation. After transplantation, cell survival and colonization were observed. The purpose of this study was to conduct a successful operation. The ST-III system was successfully harvested, the reproductive cells were harvested, the gonads were removed by the GFP-OLVAS system, and the cells were successfully harvested after transplantation of the external cells. After the transplantation, 70% of the cells were low during the transplantation, and 400% of the cells were checked after 1 month after the transplantation. Gonadal transplantation, gonad transplantation, gonadotomy, gonadal transplantation, gonadal transplantation,