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カルボニル還元酵素による卵巣がん転移抑制の分子機構

羰基还原酶抑制卵巢癌转移的分子机制

基本信息

批准号：
14657054
负责人：
土田成紀
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Hirosaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

1 カルボニル還元酵素による血管内皮細胞増殖因子(VEGF)遺伝子発現とp53タンパク質レベルの変化マウスカルボニル還元酵素(CR)の発現ベクターをヒト卵巣がん細胞株A2780などにリポフェクトアミンを用いて導入した。トランスフェクトした細胞を10%ウシ胎児血清を含むRPMI1640培地で培養した。細胞数はAlamar Blue法で測定し、細胞形態は位相差顕微鏡で観察した。CR、VEGF、p53の発現をウエスタンブロット法で検討した。CR発現ベクターの導入により卵巣がん細胞でCRの発現を認めた。CR発現に伴い、細胞増殖や細胞形態に明らかな変化を認めなかったが、VEGFの発現は低下した。また、CRを発現した細胞、コントロールの細胞ともにp53タンパク質は検出できなかった。ヒト卵巣がん細胞の抗がん剤、ドキソルビシンに対する感受性が、CRの発現に伴い変化するか検討した。ドキソルビシンによる卵巣がん細胞増殖抑制の程度は、CR発現の有無で明らかな変化を認めなかった。2 CRによる発現抑制に係わるVEGF遺伝子のしスエレメントの検討CRの発現によりVEGFのどのタイプが発現抑制を受けるのか、VEGF-A、B、C、Dの各抗体を用いてウエスタンブロット法で検討した。CRにより制御を受けるのはVEGF-Dと同定された。現在、VEGF-D遺伝子のプロモーター領域のコンストラクトを作製し、A2780細胞にトランスフェクトし、CRによる発現抑制に係わる領域を明らかにする準備を進めている。

1. Expression of VEGF gene and p53 protein in cell line A2780. Expression of CR gene in cell line A2780. 10% of the fetal serum was cultured with RPMI1640. Cell count was measured by Alamar Blue method and cell morphology was observed by microscope. CR, VEGF and p53 are detected by the method of DNA sequencing. CR discovery is introduced into the cells and CR discovery is recognized. CR development, cell proliferation, cell morphology, VEGF development, and growth The cell that CR sends out, the cell that sends out, p53, the cell that sends out. The response of the cells to the response, response, response and response of CR was investigated. The degree of inhibition of cell proliferation and CR occurrence are also discussed. 2. The expression inhibition of CR was detected by VEGF gene and VEGF A, B, C, D antibodies. CR control system and VEGF-D control system At present, VEGF-D gene expression in the field of gene expression control, A2780 cells in the field of gene expression control, CR gene expression inhibition in the field of gene expression control preparation.