in vivoにおける糸球体上皮細胞再生の試み

尝试在体内再生肾小球上皮细胞

• 批准号: 14657256
• 负责人: 松阪 泰二
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Tokai University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657256/
• 关键词: 糸球体上皮細胞; 腎臓病; 再生医療; トランスジェニックマウス; 糸球体硬化症; テトラサイクリン; 脱分化; SV40 T抗原; SV40T抗原

1.Nphs1-tTAトランスジェニック(TG)マウスの解析:11匹のTGマウスが得られたが、トランスジーンの発現はいずれも弱く、発現のレポーターであるEGFPの発光は検出できなかった。RT-PCRで検出されたtTAの発現が最も強い系統を、SV40Tマウスとの交配用に選択した。2.tet-op SV40Tマウスの解析:筋肉内iv vivo electroporationによりtTAを導入し、レポーターlacZ遺伝子の発現を解析した。2系統に強く、1系統に弱く発現が認められ、これらを交配用に選択した。3.Nphs1-tTA, tet-op SV40TダブルTGマウスの解析:SV40Tの発現は弱く、腎臓の形態は正常であった。Nphs1-tTAマウスのトランスジーンの発現が弱いのが問題と考えられた。4.NPHS2-tTAマウスの作製:上記問題を解決するため、Nphs1プロモーターより、発現のペネトランスが高いと報告されているNPHS2(human podocin gene)のプロモーターをクローニングし、tTA geneと結合させた。また、EGFPが、トランスジーンの発現をモニターするのに役立たなかったため、今回はlacZを結合させた。マウス受精卵200個にマイクロインジェクションし、10匹のTGマウスを得た。1系統のマウスが、すべての糸球体上皮細胞に強力にlacZを発現した。5.今後の計画:本プロジェクトの完遂には、1)NPHS2-tTAマウスが、tTAを発現している事の確認、2)tet-op SV40Tと交配、3)ダブルTGマウスにおけるSV40Tの発現、テトラサイクリンによる調節性の解析、4)形態的解析が必要で、これらを計画の期間内に完了する事は不可能となった。本計画は、新たな実験手段の開発を含み、また興味深い結果を期待できるので、これを続行すべく新たな研究費の獲得をめざしている。

1. Nphs1-tTA transition to TG analysis:11-tTA transition to TG analysis:11-tTA transition to TG analysis, TG analysis to TG analysis to TG analysis. RT-PCR detects the presence of TTA and SV40 TTA and selects them for mating. 2.tet-op SV40T analysis: iv vivo electrolysis in muscle, analysis of tTA introduction, and analysis of Z gene expression 2. System strong, 1. System weak, 2. System weak, 3. System weak, 3. 3. Nphs1-tTA, tet-op SV40T TG:SV40T Nphs1-tTA is the most important part of the problem. 4. NPHS2-tTA gene system: the above problem is solved, Nphs1 is solved, and the generation of NPHS2 (human podocin gene) is realized. The first time I saw it, I saw it. 200 sperm cells, 10 TG cells 1. Strong lacZ expression in human epithelial cells 5. Future plans: 1)NPHS2-tTA detection, confirmation of tTA detection, 2)tet-op SV40T mating, 3) analysis of regulation of SV40T detection, 4) analysis of morphology, necessity, and impossibility of completion within the duration of the project. This project aims to develop new research methods, including the development of new research methods, and the development of new research methods.