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ブタ劇症肝炎モデルの確立と人工肝補助療法による治療効果の検討

猪暴发性肝炎模型的建立及人工肝辅助治疗的疗效观察

基本信息

批准号：
14657301
负责人：
大島宣雄
金额：
$ 2.05万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

研究代表者らはバイオ人工肝臓への応用を目的として、多孔質樹脂を細胞固定化用の担体とする充填層型リアクタを開発した。本年度はこのリアクタを用いて肝不全のブタへの体外灌流を行い、治療効果を透析を行った群と検討した。[方法]培養体積1Lの充填層型リアクタを用いた。ブタから遊離した肝細胞100gを固定化し、このリアクタシステムを用いて灌流培養を行った。培地の酸素濃度とpHをそれぞれ40%と7.4に調節した。体重9〜12kgのブタの門脈内にα-amanitine(0.15mg/kg)とlipopolysaccharide(1μg/kg)を注入し、劇症肝不全モデルを作成した。薬剤注入後22hから8hの体外灌流を行い、hollow-fiber dialyzerを用いてブタの血液をリアクタの灌流液にて透析した。コントロールとして、肝細胞を含まないリアクターを用いて灌流を行った。[結果]薬剤投与により、22h後の血中AST値は10000IU/L以上となり、劇症肝不全の病態を示した。血中アンモニア濃度は急激に上昇し、22hの時点で305μg/dLとなったが、肝機能補助群では灌流開始後減少に転じ、8hの灌流終了時点では225μg/dLであった。しかし、灌流停止後には再び上昇した。一方、肝細胞を含まない装置に灌流した群では灌流開始直後に希釈による一過性のアンモニア濃度の低下を認めたものの、その後は再び上昇した。対外灌流を行わないブタは薬剤の投与後平均44時間で死亡したのに対し、肝細胞を含まない装置に灌流したコントロール群では38時間に短縮し、治療群において51時間と延長傾向を認め、8時間の肝機能補助でも生存時間の延長効果があることが示された。さらに、22h以降、継続して人工肝臓への灌流を行う事により、最長73hの生存時間を記録した。[結語]充填層型バイオ人工肝臓の肝機能補助効果がin vivoの灌流実験によって実証された。

The research representative has developed a new type of porous resin for cell immobilization This year, the treatment of liver failure and in vitro perfusion were discussed. [Method] The culture volume is 1L and the filling layer type is different. 100g of free hepatocytes were immobilized and cultured in perfusion medium. The concentration of acid in the culture medium is adjusted from 40% to 7.4%.α-amanitine(0.15 mg/kg) and lipopolysaccharide(1μg/kg) were injected into the portal vein of rats weighing 9 ~ 12kg to create severe liver failure. 22h after injection, 8 h after infusion, the blood was perfused and dialyzed with a hollow-fiber dialyzer. The liver cells were perfused. [Results] The AST value in blood was more than 10000IU/L after 22 hours of administration, and the pathological symptoms of severe liver insufficiency were indicated. The serum concentration increased rapidly at 22h, decreased rapidly at the beginning of perfusion, and decreased rapidly at 8 h, reaching 305μ g/dL. When perfusion stops, it rises again. The liver cells were perfused with a single device, and the concentration of the drug decreased transiently immediately after the start of perfusion. The average time of death was 44 days after administration of the drug, and the average time of death was 38 days after administration of the drug. The average time of death was 51 days after administration of the drug. The average time of survival was 8 days after administration of the drug. The survival time of artificial liver perfusion was recorded after 22h and 73h. [Conclusion] The liver function supplement effect of artificial liver with filling layer type is proved in vivo perfusion system.