術後癒着防止を目的とした羊水中の創傷治癒促進・癒着形成抑制因子の分離とその同定

分离鉴定促进伤口愈合、抑制羊水中粘连形成的因子，预防术后粘连

• 批准号: 14657414
• 负责人: 村上 節
• 金额: $ 1.73万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657414/
• 关键词: ヒト羊水; 細胞増殖; 創傷治癒; 羊水; 表皮角化細胞

【目的】羊水中の創傷治癒因子、癒着防止因子の存在を動物実験系で確認することを目的とした。これに先立ち、細胞培養系を用いたバイオアッセイ系を確立するために、表皮角化細胞を用いた培養実験を行った。【方法】羊水の準備:羊水過多の治療及び診断のために羊水穿刺を行う患者より同意を得てその検体の一部をもらいうけた。妊娠20,27,30,37週の検体を用いた。培養に用いるまで-80℃にて保存。提供者の細胞の混入をさけるために使用前に0.25μフィルターを用いて濾過を行った。細胞培養:表皮創傷治癒実験モデルとして正常ヒト新生児包皮表皮角化細胞(クラボウ)を用いた。培養液はMedium154S-HGKS(クラボウ)を用いた。培養液に10%羊水を添加し、対照として10%PBS添加培養液を用いて、細胞数1.25×104cells/mLより培養を開始した。37℃、5%CO2の条件下で加湿インキュベーターにて培養し、培養3日目に0.25%トリプシンEDTAを用いて細胞をフラスコ付着面より剥離した後に細胞数をカウントした。【結果】いずれの週数においても羊水添加培養液の方に細胞増殖が早いことが認められた。週数間の差については20週において早い傾向が認められたが症例数が少なく、週数間に有意な差は検出されなかった。【考察】ヒト羊水の添加により、正常ヒト表皮角化細胞の増殖能は亢進した。このことは羊水中に含まれる何らかの因子が、皮膚損傷の場における表皮角化細胞の細胞増殖を助け、創傷治癒をもたらすことを示唆している。また、この作用は妊娠後期よりも中期の羊水につよく認められ、この作用をもたらすのは妊娠中期に高含有量となる物質であることが推定された。

[Purpose] To confirm the presence of wound healing factors and healing prevention factors in amniotic fluid in animal systems.これに成ち、Cell culture system いたバイオアッセイをEstablishment するために、Epidermal keratinocytes cultured using いた実験を行った. [Method] Preparation of amniotic fluid: Treatment and diagnosis of polyhydramnios are performed through amniocentesis and patient consent is obtained. It is available for use at 20, 27, 30 and 37 weeks of pregnancy. The cultured cells were stored in a laboratory at 80°C. The provider's cells are mixed with 0.25 μF of fluorescein and filtered with fluorine before use. Cell culture: epidermal wound healing and normal foreskin epidermal keratinocytes (クラボウ) were used. The culture medium is Medium154S-HGKS (クラボウ). The culture medium was added with 10% amniotic fluid, the culture medium was added with 10% PBS, and the number of cells was 1.25 × 104 cells/mL, and the culture was started. 0.25% for 3 days of culture using a humidified air conditioner at 37°C and 5% CO2 The トリプシンEDTA is made of いてcell をフラスコ and the surface is peeled off and the number of cells is をカウントした. 【Result】The number of weeks is においてもAmniotic fluid is added to the culture medium and the cells are proliferated as early as possible. The difference between the number of weeks is the same as 20 weeks. 【Investigation】The addition of amniotic fluid can increase the proliferative capacity of normal epidermal keratinocytes.このことはAmniotic fluid containing まれるらかのfactor が, skin damage のfield における table It helps in cell proliferation of keratinocytes and aids in wound healing. The effect of また、このはThe third trimester of pregnancyよりものamniotic fluidにつよくcognize the role of められ、このIt is estimated that the high content of the substance in the second trimester of pregnancy is the same.