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ビーム偏向法とキャピラリー電気泳動分析による細胞死関連物質輸送の新しい測定法

利用光束偏转和毛细管电泳分析测量细胞死亡相关物质转运的新方法

基本信息

批准号：
14658212
负责人：
呉行正
金额：
$ 1.92万
依托单位：
University of Fukui
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

1.細胞活動で細胞膜を通す物質輸送過程での濃度勾配の経時変化をビーム変更信号で捉えるレーザー顕微偏向測定法を確立した。2.バイオ人工肝臓に用いられるヒト肝細胞株HepG2をモデル細胞として培養した。この細胞はDMEM培地に10%(体積)のウシ胎児血清(FBS)を添加し、培養したものであった。培養温度は37℃、5%炭酸ガス雰囲気下で培養した。肝細胞は「付着性」の細胞で、培養皿の底面に付着した。3.本法により、培養した肺細胞の死亡過程での物質輸送に起因する濃度勾配変化を連続的にモニタリングした。4.生きている肺細胞及び死んでいる肺細胞の変更信号を比較すると、明らかに生きている細胞が変更信号の変化が観察されて、死んでいる細胞には変更信号の変化が小さかったことも明らかにした。5.たんぱく質試料をキャピラリー内で濃縮してから、キャピラリー電気泳動分析を行う方法を提案した。特に、キャピラリー内でたんぱく質を濃縮する多孔性膜法及び、良性電解質を使用しない等電点電気泳動濃縮法について詳しく検討した。この方法により、キャピラリー電気泳動法で単一細胞及びその培養液中の微量なたんぱく質を測定できる可能性がある。6.また、細胞及びその培養液中の小さいイオンをたんぱく質などの干渉を受けずに直接キャピラリー電気泳動法で測定する方法も開発した。

1. The cell activity, cell membrane passage, material transport process, concentration coordination, time change, and signal change have been established. 2. The artificial liver is cultured using the HepG2 をモデル cell line of いられるヒト liver cell line. The cells were cultured by adding 10% (volume) fetal fetal serum (FBS) in DMEM. The culture temperature was 37°C and 5% carbonic acid in an atmosphere. Hepatocytes are "attached" cells, and the bottom of the culture dish is attached. 3. This method is based on the concentration of the substance that causes the death process of cultured lung cells and the concentration of the substance in the lung cells. 4. Comparison of the signal changes of raw lung cells and dead lung cells. The more signal is changed, the more signal is changed, the more the signal is changed, the smaller the signal is, the smaller the signal is, the more the signal is, the more the signal is, the more the signal is, the more the signal is, the more the signal is. 5. Proposed methods for the concentration and electrophoresis analysis of high-quality sample materials. Special に, キャピラリー内でたんぱく Quality を Concentrated porous membrane method and び, benign The electrolyte was prepared using the isoelectric point electrophoresis concentration method. The method of このにより, キャピラリーelectrophoresis method is used to measure the possibility of できる and がある using trace amounts of なたんぱくquality in a single cell and びその culture medium. 6. Small stems in the stems, cells and stem culture medium The measurement method is directly measured by the electrophoresis method.