ビーム偏向法とキャピラリー電気泳動分析による細胞死関連物質輸送の新しい測定法

利用光束偏转和毛细管电泳分析测量细胞死亡相关物质转运的新方法

• 批准号: 14658212
• 负责人: 呉 行正
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: University of Fukui
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14658212/
• 关键词: ビーム偏向法; 単一細胞; キャピラリー電気泳動; 濃度勾配; タンパク質

1.細胞活動で細胞膜を通す物質輸送過程での濃度勾配の経時変化をビーム変更信号で捉えるレーザー顕微偏向測定法を確立した。2.バイオ人工肝臓に用いられるヒト肝細胞株HepG2をモデル細胞として培養した。この細胞はDMEM培地に10%(体積)のウシ胎児血清(FBS)を添加し、培養したものであった。培養温度は37℃、5%炭酸ガス雰囲気下で培養した。肝細胞は「付着性」の細胞で、培養皿の底面に付着した。3.本法により、培養した肺細胞の死亡過程での物質輸送に起因する濃度勾配変化を連続的にモニタリングした。4.生きている肺細胞及び死んでいる肺細胞の変更信号を比較すると、明らかに生きている細胞が変更信号の変化が観察されて、死んでいる細胞には変更信号の変化が小さかったことも明らかにした。5.たんぱく質試料をキャピラリー内で濃縮してから、キャピラリー電気泳動分析を行う方法を提案した。特に、キャピラリー内でたんぱく質を濃縮する多孔性膜法及び、良性電解質を使用しない等電点電気泳動濃縮法について詳しく検討した。この方法により、キャピラリー電気泳動法で単一細胞及びその培養液中の微量なたんぱく質を測定できる可能性がある。6.また、細胞及びその培養液中の小さいイオンをたんぱく質などの干渉を受けずに直接キャピラリー電気泳動法で測定する方法も開発した。

1. Cell activity, cell membrane, substance transport process, concentration coordination, time-varying signal detection, and micro-bias assay were established. 2. The artificial liver was cultured in HepG2 cells. The cells were cultured with 10%(volume) fetal serum (FBS). Incubate at 37℃, 5% carbon acid, and ambient temperature. Liver cells are "attached" to the bottom of the culture dish. 3. This method is used to determine the cause of substance transport in the death process of lung cells in culture. 4. The changes in the signal of the lung cells in life and death are compared. The changes in the signal of the lung cells in life and death are detected. The changes in the signal of the lung cells in death are detected. 5. The quality of the sample is concentrated in the sample, and the method of electrokinetic analysis is proposed. In particular, the porous membrane method for the concentration of electrolytes in the atmosphere and the electrokinetic method for the concentration of benign electrolytes using isoelectric points are discussed in detail. This method provides the possibility of determining trace amounts of trace amounts. 6. Development of a method for the determination of small amounts of protein in culture solutions of cells and cells by direct electrokinetic method.

项目成果

Xing-Zheng Wu, Keiko Akiyama: "Time-resolved Chemiluminescence Study of Photocatalytic Reaction of TiO_2"Chem.Lett.. 1108-1109 (2003)

吴兴正，秋山惠子：“TiO_2光催化反应的时间分辨化学发光研究”Chem.Lett.. 1108-1109 (2003)

Tiemin Huang, Peter Ertl, Xing-Zheng Wu, Susan Mikkelsen, Janusz Pawliszyn: "Microfabrication of microfluidic device for isoelectric electric focusing"Sensors and Materials. 14. 141-149 (2002)

Tiemin Huang、Peter Ertl、Xing-Zheng Wu、Susan Mikkelsen、Janusz Pawliszyn：“用于等电电聚焦的微流体装置的微加工”传感器和材料。

呉 行正: "キャピラリー電気泳動分析におけるオンライン濃縮"ぶんせき. 151-152 (2003)

Yukimasa Wu：“毛细管电泳分析中的在线富集”Bunseki 151-152 (2003)。

Jiaqi Wu, Xing-Zheng Wu, Tiemin Huang, Janusz Pawliszyn: "Analysis of proteins by CE, CIEF and microfluidic devices with whole column imaging detection"HUMANA PRESS (In press). (2004)

Jiaqi Wu、Xing-Zheng Wu、Tiemin Huang、Janusz Pawliszyn：“通过 CE、CIEF 和具有全柱成像检测的微流体装置分析蛋白质”HUMANA PRESS（正在出版）。

Xing-Zheng Wu, Kasanori Kasashima, Masahiko Sakai: "Capillary Electrophoresis of Small Anions in Complex Samples with a Hollow Fiber Sampling Inlet End"Anal.Sci.. 19. 1541-1543 (2003)

吴兴正、Kasanori Kasashima、Masahiko Sakai：“具有中空纤维采样入口端的复杂样品中小阴离子的毛细管电泳”Anal.Sci. 19. 1541-1543 (2003)