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牛血清アルブミンーフラグメントのコンフォメ-ションとその界面活性剤による変化

牛血清白蛋白片段的构象及其由表面活性剂引起的变化

基本信息

批准号：
03804030
负责人：
竹田邦雄
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Okayama University of Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

Nーブロムコハク酸イドミと酵素ペプシンを使って牛血清アルブミン(BSA)のポリペプチドを切断し8種類のBSAフラグメントを単離した.いずれのフラグメントについても,N末端とC末端のアミノ酸分析を行い,親分子の一次構造上における位置を同定し,以下の検討を行った.備品として購入した高感度示差屈折計は小さいフラグメントの濃度決定に使用した.各フラグメントの二次構造含量の変化は円偏光二色性測定により追跡した.BSAは非常に類似したドメインを3つ持つ.ドメインをそのまま含む形のフラグメントのαーヘリックス構造は,尿素と塩酸グアニジン変性に対してBSAのそれと同程度抵抗した.また,これらのフラグメントのαーヘリックス含量はドデシル硫酸ナトリウム(SDS)溶液中でBSAと同じように段階的に減少した.これらの結果は,BSAのドメイン間に相互作用がないこと,さらにBSAがドメイン単位で二次構造を保持する機能をもち,ドメイン単位で構造変化をすることを示している.一方,SーS架橋を還元切断したフラグメントは,上の変性剤溶液中で,同じくこの架橋をすべて還元切断したBSAと非常に類似した二次構造変化をした.これは,BSAがドメインサイズよりさらに小さい単位で同じようなアミノ酸の並びをもち,それらの部分が相互に似た二次構造をとるためと思われる.また,BSAおよびその3分の2をしめるフラグメントのコンフォ-メ-ション変化に伴いそれらの回転相関時間も変化することが,時間分解蛍光偏光解消の測定から明らかになった.平行して,尿素によって壊れたBSAの二次構造がSDSの添加によって復元される様子も初めて定量的に検討した.同様の検討をフラグメントについても行う予定である.

Nーブロムコハク acid イドミとenzyme ペプシンをって bovine serum アルブミン (BSA) のポリペプチドを cut 8 types of broken BSA フラグメントを単利した.いずれのフラグメントについても, N-terminal and C-terminal のアThe analysis of ミノ acid is done, the position of the primary structure of the promolecule is determined, and the following is done. The spare parts are purchased. A high-sensitivity differential refractometer is used to determine the concentration of the small-sized filter. The secondary structure content of each filter is determinedの変化は円polarized dichroism measurementによりtrackingした.BSAはvery similarしたドメインを3つholdつ.ドメインBSAのそれと Same degree of resistance as した.また, これらのフラグメントのαーヘリックスcontent はドデシルsulfate ナトリThe results of the reduction of BSA in SDS solution, and the results of BSA in different stages.にInteractionがないこと,さらにBSAがドメイン単bitでSecondary structureをKeeping the functionをもち,ドメイン単The position of the structural change is the same as that of the original structure. In the solution, it is very similar to the bridging and cutting of the bridging and cutting of the BSA and the secondary structure of the secondary structure.は, BSA がドメインサイズよりさらに小さい単bit で同じようなアミノ acid の与びをもち, それらの partが Mutual resemblance to the secondary structure をとるためと思われる.また, BSA およびその3分の2をしめるフラグメントのコンフォ-メ-ション変化に合いそれらの回転 Related time も変化することが, time decomposition and polarization eliminationのMeasurement of から明らかになった. Parallel して, Urea によって壊れたBSA のSecondary structure がSDS のAdd によって富元される様子もInitial めてquantitative に検question した. Same 様の検question をフラグメントについても行う下注である.