パッチクランプ法による植物細胞の電気融合に関する基礎研究

膜片钳法电融合植物细胞的基础研究

• 批准号: 04650855
• 负责人: 山口 学
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04650855/
• 关键词: パッチクランプ; 植物細胞; 電気細胞融合; プロトプラスト; パルス電圧

試料にはサラダ菜葉肉およびピーマン果肉を用い、そのプロトプラスト化(裸細胞)とガラス電極の作成の技術は確立できた。電極にパッチクランプされた細胞内外の電気的絶縁機密(ギガ・オーム抵抗)の技術は確立できなかった。そのため細胞膜に通電した電流の漏電による雑音電流が大きく、細胞膜のイオンチャンネル電流値は得られず、実験は継続中である。それと並行して高周波交流電圧印加とパルス電圧印加による一対の同種および異種細胞間の融合特性および融合速度を調べた。実験はPH=5.5、マン=トール10wt%、塩化カルシュウム0.1mM溶液中で、それらの融合過程を顕微鏡下のビデオ撮影で追跡し、以下の結果をえた。融合特性:電圧印加時間を一定にして、パルス印加電圧およびパルス巾が融合におよぼす効果を調べた。1)印加電圧とパルス巾により融合不能領域、融合領域、細胞破壊領域が存在し、そのマップを得た。融合の下限印加電圧は、パルス巾が短い領域では高電圧が必要で、パルス巾が長くなるほど低電圧となり、これは細胞種によらず共通の傾向であった。しかし、上限印加電圧とパルス巾の関係は細胞種により異なった。2)融合初期に離脱した細胞間では再融合しない領域が存在した。融合速度:融合の初期速度から速度定数を定義し、細胞性状および操作条件が速度定数におよぼす影響を調べた。1)一対の細胞間で細胞径に差異がある場合の方が融合速度は速い。2)細胞径の小さいもの同士の方が融合速度は速い。3)速度定数におよぼす環境温度の影響は大きい。融合の活性化エネルギーは約120kJ/molであった。融合の際の細胞膜の可動性と大いに関係する。4)融合速度はプロトプラスト作成後の経過時間によって影響され、作成後2時間以内の試料が最も良好な再現性を示した。また、融合速度は細胞年令によっても影響され、細胞年令の若いものほど速い。

The raw material is used to make sure that the meat and meat is used to make sure that the meat is cured. The electronic equipment is used to ensure that the equipment of the extracellular and extracellular electronic equipment is used as a secret (anti-interference) equipment. The cell membrane is affected by the leakage of the current, the sound of the current is high, the cell membrane is high, the current is low, and the current is low. At the same time, the high-cycle AC, Inca, Inca, India, Canada, India The following results are as follows: the following results are as follows: in the process of fusion, the following results are as follows: the following results are as follows: in the process of fusion, the following results are as follows: in the process of fusion, the following results are as follows: the following results are as follows: PH=5.5, temperature = 10wt%, concentration in 0.1mM solution, and fusion process. Fusion features: electronic Inca time is very important, and the combination of Indo-Canadian and Indo-Canadian electronic equipment is very important. 1) the integration of Inca electric power equipment and towels can not be in the field of integration, and there are problems in the field of integration. The integration of low-limit Inca and Canadian power stations, short-term applications in the field of high-level power generation, long-term promotion of low-level power generation and low-voltage power generation, and the development of low-level power supply systems are common to customers. The power supply, the upper limit, the India plus the electricity, the power supply, the towel, the cell, the cell. 2) in the initial stage of fusion, there are some problems in the field of intercellular refusion. Fusion speed: fusion "initial speed", "speed definition", "cell character", "operating conditions", "speed number", "shadow", "speed". The main results are as follows: 1) the fusion speed of the combination of the difference of cell diameter and the difference of cell diameter is very fast. 2) "small cell diameter", "Tongshi" square, "fast" fusion speed. 3) the speed is very high, and the ambient temperature has a big impact. The fusion of activating genes is related to 120kJ/mol activation. Fusion of cell membrane motility is very important. 4) after the fusion speed is completed, the performance of the data will be the best within 2 hours after completion. The speed of fusion, cell age, cell age and cell age.

项目成果

山口 学: "植物細胞の電気融合特性と融合速度" 化学工学論文集.

Manabu Yamaguchi：“植物细胞的电融合特性和融合速度”化学工程杂志。