組換えマウスプロラクチンを用いた酵素免疫測定法の確立

重组小鼠催乳素酶联免疫分析方法的建立

• 批准号: 04660294
• 负责人: 針谷 敏夫
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Meiji University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04660294/
• 关键词: プロラクチン; 酸素免疫測定法; エンザイムイムノアッセイ; マウス

現在、生体内の物質を測定する方法としてはその物質の抗体を用いる免疫測定法が確立しており、アイソトープを利用して行う放射性免疫測定法(ラジオイムノアッセイ、RIA)と酵素を利用して行う非RI系の酵素免疫測定法(エンザイムイムノアッセイ、EIA)の2つに分けられる。一般には感度が優れているRIAが好まれているが、RIの取り扱いに習熟する必要があり、また施設の面でも制限があるなどの欠点もある。EIAは通常の実験室で行え、また初心者においても比較的簡単に行えるなど有利な点がある。最近、マウスプロラクチン(mPRL)に関する研究を行ってきた中で、そのcDNAを用いて組換えmPRLの大腸菌における大量生産に成功した。そこで、この組換えmPRLを用いて抗体を作り、RI取り扱い施設のない我々の研究機関において十分な感度を持ったmPRLのEIAを確立することが有益であると考え、本研究を行なった。1)組換えmPRLを1回1mg、フロインドアジュバントにてエマルジョンを作製し、ウサギの皮下に投与し、以後2週間おきに追加免疫し抗血清を作成した。2)得られた抗血清より硫安塩折法およびイオン交換クロマトグラフィーによりIgG分画を回収し、得られたIgGにさらにペルオキシダーゼ(HRP)を標識した。3)EIAは固相法によるサンドイッチ法により行った。96穴EIA用プレートに抗体を吸着させ、次に標準抗原又はマウス血清、HRP標識抗体の順に反応させ、o‐フェニレンジアミン(OPD)による発色をEIAプレートリーダー(BioRad)にて492nmにおける吸光度を測定した。検討したすべての実験において組換えmPRL炭体は生体内のプロラクチンとよく反応し、感度、再現性とも良好な結果が得られ、本抗体を用いたEIAは実用に供せられると考えられた。

In vivo, bioassay methods were used to determine the antibody. the antibodies were determined by immunoassay, and the radioimmunoassay (RIA) was performed by radioimmunoassay (radioimmunoassay, RIA). The enzyme was detected by enzyme immunoassay (enzyme immunoassay). The general sensitivity is that the RIA is good, the RI is suitable, the necessary equipment is required, and the equipment is limited. EIA is usually in the room, and it is advantageous to compare the behavior of the first time to the first time. Recently, a large number of mPRL isolates have been successfully produced in a large number of mPRL strains in cDNA research. The anti-virus antibody was used in the mPRL, and the RI was used in our research machine. the sensitivity of the research machine was very high, and the results showed that it was very sensitive to the use of anti-mPRL antibody. This study was conducted. 1) the tissue mPRL was returned to 1mg, and the immune antiserum was added in the next 2 years after subcutaneous injection. 2) get the antiserum, thioampere, thioampere, thi 3) EIA solid phase method. The 96-point EIA absorbed the serum with the antibody of the standard antigen, the serum of the standard antigen, the antibody of the HRP label, the antibody of the HRP label, the antibody of the antibody (OPD), the color, the EIA, the antibody, the absorbance, the absorbance. This antibody was tested by mPRL in vivo. The results showed that the response, sensitivity and reproducibility were good, and the antibody was used in vivo. This antibody was used to test the antibody.