培養心筋細胞を用いた覚醒剤毒性の検索

使用培养的心肌细胞寻找刺激毒性

• 批准号: 04670356
• 负责人: 的場 梁次
• 金额: --
• 依托单位: 佐賀医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04670356/
• 关键词: 成熟ラット; 心筋細胞; 細胞培養; methamphetamine; 形態学

培養細胞培養は200-250gの成熟Wistar系雄性ラット心臓を用いた。ペントバルビタール50mg/kg体重麻酔下にラットの心臓を摘出し、氷冷(4℃)した潅流液にて拍動を止め、循環潅流装置によって、心臓に95%O_2,5%CO_2混合ガスを通気し、Normal Calcium free Buffer Solution(NCF)(NaHCO_3 25mM,KH_2PO_4 1.2mM,MgSO_4 1.2mM,Glucose 11mM 5分)とKrebs-Henseleit Solution(KH)(NCF+CaCl_2 1.25mM 5分)で洗浄し、最後に0.05% Collagenase(Boehringer)液を30分潅流した。その後心臓を細切し、15分間37℃でincubationし、2000rpmで30秒遠心し、心筋細胞を得た。酵素処理した心筋細胞を10%仔牛血清を添加したMen Eagle's Medium中で37℃,5%CO_2下に30分静置し、その後、attached cells(non-myocyte rich)とnon-attached cells(muocyte rich)に分け、2ml dish(1×10^6 cell/dish)にて24時間培養後、実験に供した。心筋細胞dishをControl,MA0.1×10^<-3>Mと0.1×10^<-6>Mの3組に分けて実験した。3組のdishは1時間、4時間後顕微鏡で観察し、形態変化及び死亡した心筋細胞の数を記録した。結果は、1時間、4時間の死亡率はControlでは6.5%,8.1%,MA0.1×10^<-6>Mでは23.8%,26.7%,MA0.1×10^<-3>Mでは38.5%,42%であった。正常心筋細胞は横紋が見られ、変性した心筋細胞は横紋を消失し、細胞膜が融解し、空胞変性も認められた。細胞構造を消失し、円形の膜だけのものは死亡した心筋細胞である。

Cultured cells are cultured using 200-250g of mature Wistar male ラット心臓を.ペントバルビタール 50mg/kg body weight hemp infusion under the にラットの心臓をpick out し, ice cold (4℃) した潅fluid にて shot Dynamic stopper, circulating flow device によって, center 95%O_2, 5%CO_2 mixed ガスを通気し, Normal Calcium free Buffer Solution (NCF) (NaHCO_3 25mM, KH_2PO_4 1.2mM, MgSO_4 1.2mM, Glucose 11mM 5 minutes) and Krebs-Henseleit Solution (KH) (NCF+CaCl_2 1.25mM 5 minutes), wash thoroughly, and finally pour 0.05% Collagenase (Boehringer) solution for 30 minutes. The heart is finely chopped, incubated at 37℃ for 15 minutes, telecentric at 2000rpm for 30 seconds, and the heart muscle cells are harvested. After enzyme treatment, add 10% calf serum to heart muscle cells and add Men Eagle's Medium to 37℃, 5% CO_2 for 30 minutes, attached cells (non-myocyte rich) and non-attached cells (muocyte rich), 2ml dish (1×10^6 cell/dish) After 24 hours of culture, it is ready for use. Cardiac cells dishをControl,MA0.1×10^<-3>Mと0.1×10^<-6>Mの3 groupに分けて実験した. In the three groups of dishes, microscopic examination, morphological changes and the number of dead cardiac cells were recorded at 1 and 4 hours. The results showed that the mortality rate at time 1 and time 4 was 6.5%, 8.1%, MA0.1×10^<-6>M, 23.8%, 26.7%, MA0.1×10^<-3>M, 38.5%, and 42%, respectively. Normal myocardial cells have no transverse stripes, and the abnormality of cardiac myocardial cells means that the transverse stripes have disappeared, the cell membrane has melted, and the abnormality of empty cells has not been recognized. The cell structure disappears, and the membrane in the shape of the circle dies, and the heart cells die.