Globoid cell leukodystrophyの分子遺伝学的研究

球状细胞脑白质营养不良的分子遗传学研究

• 批准号: 04670491
• 负责人: 小林 卓郎
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04670491/
• 关键词: Krabbe病; Galactosylceramidase I; Globoid cell leukodystrophy; cDNAクローニング

遺伝性脱髄疾患の一つにgalactosylceramidaseIが欠損しているKrabbe病(CLD)がある。我々はこの10年間本疾患の病態に関して研究を行ってきており、galactosylceramideの分解は二つの酵素で触媒され、そのうちgalactosylceramidaseIのみがGLDで欠損し、galactosylceramidaseIIは正常であることを報告した。この結果ヒトおよびマウスGLDでgalactosylceramideは蓄積せず、galactosylsphingosineのみが蓄積することを明らかにした。蓄積したgalactosylsphingosineは細胞毒であるため、ミエリン形成細胞であるオリゴデンドログリアやシュワン細胞が死滅し、脱髄が起こると考えられる。今回の研究目的は欠損酵素の分子生物学的特徴を明らかにすることである。平成4年度はブタの腎臓より従来の方法を改良し、約200000倍まで精製を行った。最終産物はSDS-PAGEで単一のバンドを示し、分子量は54KDであった。N末端のアミノ酸配列をブロッテイングの後アミノ酸シーケンサーで検索したところ11個の連続した配列が決定され、その配列はコンピューターにて全く新しいペプチドの可能性が示唆された。また、endopeptidase処理したペプチド断片の分析でも2ケの新しいペプチド配列が見いだされた。これらのアミノ酸配列をもとにPCRを用いて、あるいはスクリーニングによりブタ腎臓より作成したcDNAライブラリーを鋳型にcDNAクローニングを開始したが、目的とするクローンはまだ得られていない。

A genetic disorder called galactosylceramidaseI is called Krabbe disease (CLD). In the past 10 years, we have conducted research on the pathogenesis of this disease, including the decomposition of galactosylceramide and the enzyme catalyst, and the lack of damage to galactosylceramidaseI and galactosylceramidaseII GLD. The results are as follows: Galactosylceramide, Galactosylphine, Galactosylceramide, Galactosylphine. The accumulation of galactosylsphingosine in cells is a major cause of death. The aim of this study is to characterize the molecular biology of deficient enzymes. In 2004, the method of improving the quality of the kidney was improved, about 200000 times more refined The final product was purified by SDS-PAGE and had a molecular weight of 54KD. The N-terminal acid alignment is determined by the 11-terminal acid alignment, and the new alignment is determined by the 11-terminal acid alignment. The analysis of endopeptidase fragments is carried out in the following ways: This is the first time that a gene has been cloned into a human genome.

项目成果

Takeo Yoshimura: "Protein kinase C in rat brain myelin" Neurochemical Research. 17. 1021-1027 (1992)

Takeo Yoshimura：“大鼠脑髓磷脂中的蛋白激酶 C”神经化学研究。

Takako Takano: "Galactosialidosis:Clinical and molecular analysis of 19 Japanese patients" Brain Dysfunct. 4. 271-280 (1991)

Takako Takano：“半乳糖唾液酸贮积症：19 名日本患者的临床和分子分析”脑功能障碍。

Takuro Kobayashi: "Accumulation of lysosphingolipids in tissues from patients with GM1 and GM2 gangliosidoses" J. of Neurochemistry. 59. 1452-1458 (1992)

Takuro Kobayashi：“GM1 和 GM2 神经节苷脂病患者组织中溶血鞘脂的积累”J. of Neurochemistry。