サイトカイン遺伝子移入腫瘍細胞を用いた肝動脈注入療法

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本年度は基礎的検討として、以下の実験結果を得た。1.遺伝子組み換え体の作製 IL2cDNA及ずTNFcDNAを、cytomegarovirus promotorを持つ、真核細胞発現ベクターpRc/CMVに組み換え遺伝子組み換え体を作製した。2.遺伝子移入における手技の確立 Interleukin2[IL2]cDNAをpRc/CMV plasmid vectorに組み換え、ヒト胃癌株化細胞MKN-28にChen-Okayama法を用いて、transfectionした。その結果、21クローンを得、約30〜60日の間、培養上清中にIL2蛋白を分泌することを確認した。その際、確かに移入細胞にIL2cDNAがtransfectされていることをPCR法にて確認した。3.VX2腫瘍由来のcell lineの樹立 ウサギの肝臓で継代移植されているVX2腫瘍をin vitroの培養系に移して細胞株を樹立し、gene transfectionを試みるとともに、VX2細胞におけるTNF,IL2,IFNのcytotoxicityをコロニー形成率やMTTassayをもちいて検討した。初年度に達成されたこと1. IL2及びTNF-cDNAのpRc/CMV plasmid vectorへの組み替え体の作成2. IL2/pRc/CMVを胃癌細胞株MKN-28にChen-Okayama法にてtransfectionすることでtransfection efficiency,gene expression efficiency,gene expression stability,protain analysisを解析することができた。3.家兎継代VX2腫瘍のcell line化とその各種サイトカインに対する感受性の測定