フルクトース2.6二燐酸合成酵素に起因する脳と腎臓の臓器特異的な糖代謝調節

果糖2.6二磷酸合酶引起的大脑和肾脏葡萄糖代谢的器官特异性调节

• 批准号: 04680201
• 负责人: 古谷 栄助
• 金额: --
• 依托单位: Osaka Medical College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04680201/
• 关键词: フルクトース6リン酸2キナーゼ; フルクトース2.6二リン酸; ラット脳; cDNA塩基配列; 肝型酵素; 筋型酵素

【ラット脳フルクトース6リン酸2キナーゼ(Frc6P2kinase)のcDNAクローニング】 ラット脳よりグアニジンチオシアネート法を用いてRNAを抽出し、オリゴ(dT)セルロースカラムでmRNA画分を得た。このラット脳mRNAよりオリゴ(dT)プライマーを用いて、Gubler & Hoffmanの方法によりcDNAを作製した。これをλgt10のEcoRIサイトに挿入し、cDNAライブラリー(ライブラリーサイズ1x10^6)を得た。プローブとして当研究室で現有するヒト肝、カエル肝Frc6P2kinaseのcDNAミックスプローブを用いスクリーニングした結果、数クローンを得た。得られたクローンを用いてライブラリーを再スクリーニングした所、さらに数クローンが得られた。制限酵素地図の結果より、異なる2種のcDNAが存在することがわかった。また、得られたクローンを用いてラット脳mRNAのノザンブロットを行なったところ、2.1kbのバンドがハイブリダイズした。【ラット脳Frc6P2kinase一次構造の決定】 クローニングしたcDNAの塩基配列をジデオキシ法を用いて調べた。1つのcDNAグループは、既に報告されている肝臓型酵素と高いホモロジーを持つが、この酵素の調節部位であるリン酸化されるSer残基を持たなかった。もう1つのグループは肝・筋型酵素とは別の遺伝子由来である心臓型遺伝子と高いホモロジーを持つcDNAであったが、心臓型酵素にはないリン酸化部位を持つことがわかった。現在、塩基配列決定を進行中である。

The cDNA library of Frc6P2kinase was extracted from the cDNA library by the method of RNA extraction and mRNA extraction. The cDNA was produced using Gubler & Hoffman's method. EcoRI is a member of λgt10 and a member of cDNA family (1x10^6) The cDNA of Frc6P2kinase was obtained from the library. The number of people who have died in the war is not enough. Two kinds of cDNA exist in the restriction enzyme site. The first step is to use a 2.1 kb DNA fragment to extract the DNA from the DNA. [Determination of primary structure of Frc6P2kinase] 1. The cDNA sequence is reported to contain the Ser residues in the regulatory site of the enzyme. 1. The origin of the enzyme and the protein of the enzyme. 2. The origin of the enzyme and the protein of the enzyme. 3. The origin of the enzyme and the protein of the enzyme. 4. The origin of the enzyme and the protein of the enzyme. Now, the decision on the base allocation is in progress.

项目成果

古谷 榮助: "フルクトース代謝と糖代謝調節" 外科と代謝・栄養. 26. 516-518 (1992)

Eisuke Furuya：“果糖代谢和糖代谢调节”《外科、代谢和营养》26. 516-518 (1992)。

A.Ogawa 他: "The Effect of Fructose 2,6-Bisphosphate Lebel and Fructose 6-Phosphate,2-Kinase Activity in the Perfused Rat Liver" Biochem.Int.

A. Okawa 等人：“果糖 2,6-二磷酸 Lebel 和果糖 6-磷酸,2-激酶活性对灌注大鼠肝脏的影响”Biochem.Int。