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線虫C.elegansにおける温度走性遺伝子のクローニングとその分子遺伝学的解析

秀丽隐杆线虫趋热基因的克隆及其分子遗传学分析

基本信息

批准号：
05804042
负责人：
森郁恵
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05804042/
关键词：
C.elegans 温度走性温度走性異常突然変異温度受容情報伝達系

项目摘要

1.tax-4遺伝子のクローニングの進行状況:tax-4遺伝子の突然変異は、温度無走性やある種の化学物質に対する化学無走性を結果するため、この遺伝子は、広範囲の刺激受容伝達機構に関わっていると考えられる。tax-4(ks11)変異は、遺伝的に第3染色体のdpy-19-unc-69の約2.5m.u.のDNA領域にマップされていたが、本年度は、さらにマッピングを詳細に行った。トランスポゾンTclの系統間多型やPCR法を利用して、tax-4遺伝子の範囲は、dpy-19-stP127(Tc1)の領域にせばめられた。現在、さらにこの領域内に存在するTc1K多型、eP6、eP7、eP8、eP9に対してのtax-4の相対的位置をサザンハイブリダイゼーションを利用して決定すると共に、ごく最近この領域内でクローニングされたced-7やemb-9遺伝子とtax-4遺伝子との位置関係を古典的な3点交雑法により、決定しようと試みている。一方、dpy-19-unc-69間のDNA領域をカバーする約30個のコスミドクローンによるtax-4(ks11)変異のレスキュー実験を試みたが、まだ、温度走性が野生型に復帰した形質転換体は得られていない。そこで、現在、この領域をカバーするYACクローンを用いてレスキュー実験を試みようと計画している。現時点では、YACクローンを含むyeast系統を増殖させ、溶菌させてパルスフィールド電気泳動法により、各染色体の分離がようやくできるようになったところである。2.TMP(トリメチルソラレン)処理による欠失突然変異の単離:TMPは、平均約1kb程度のDNAの欠失を起こすといわれている突然変異誘発剤である。この薬剤を用いて突然変異株を分離することは、1)null変異が得られる、2)遺伝子クローニングがDNAの欠失を指標として行うことができる、という利点がある。そこで、本年度は、TMPによる温度走性異常変異株の単離を行った。今のところ、好冷性変異株を2株分離した。最近の解析から、そのうちの1つ、ks48変異に母性効果があることがわかった。

1. The progress of tax-4 gene transfer: sudden change of tax-4 gene, temperature change, chemical change of species, chemical change of species, chemical change of tax-4(ks11) variant of chromosome 3, dpy-19-unc-69 and about 2.5m. u. DNA domain, this year, reverse, reverse Polytype PCR between Tcl and Tc1 was used in the domain of dpy-19-stP127(Tc1). Now, in this domain, there are Tc1K polytypes, eP6, eP7, eP8, eP 9 and corresponding tax-4 pairs. The position relationship between them is determined by using the classical three-point intersection method. The DNA domain between dpy-19 and unc-69 contains about 30 different DNA domains, such as tax-4(ks11), which are different from those of wild type. This is the first time I've ever seen a woman in my life. At present, YAC can be used to amplify yeast system, lyse bacteria and isolate chromosomes by electrokinetic method. 2. TMP treatment caused sudden changes in DNA loss:TMP treatment caused sudden changes in DNA loss at an average level of about 1kb. 1) Null-variant is obtained 2) Genome is selected from the group consisting of DNA loss indicators and positive points. This year, the temperature of the TMP is abnormal. Two plants were isolated from each other. The most recent analysis is