プロテインAゴールド・シルバ-染色法による電顕免疫二重染色法の開発

蛋白A金银染色法双重免疫染色法的开发

• 批准号: 06670034
• 负责人: 藤森 修
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Nagoya City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06670034/
• 关键词: 電顕免疫組織化学; プロテインA・ゴールド; 二重染色; 物理現像

電顕免疫二重プロテインAゴールド・シルバ-(PAGS)染色法の開発に先立ち、通常の光顕PAGS染色法に影響を及ぼす種々の条件について検討を加えた。これを基に光顕免疫二重PAGS染色法をさらに改良したone-step現像による二重PAGS染色法(光顕)を考案し(投稿準備中)、これらの成果に基づいて電顕免疫二重PAGS先駆法の開発に取り組んだ。対象抗原としては、インスリンおよびグルカゴンの2種のペプタイドを選択し、必要に応じて他のペプタイドも対象とした。電顕免疫二重染色法では、同一切片上で検出する複数の抗原に対して適当な固定剤や包埋用樹脂を選択する必要があるので、PAG法およびPAGS法に敵する固定液の種類と包埋用樹脂の検討を行い、その結果抗原がペプタイドの場合、抗原検出性の差異は、使用した固定剤の種類の違いによるよりも、包埋用樹脂の種類の違いによる差異の方が大きいことがわかった。すなわち、免疫細胞化学には比較的不適当と考えられていたEpon樹脂包埋法にエッチングを併用する方法が、LR-Whiteなどの新しい包埋用樹脂を用いるよりも、PAG法によって比較的幅広く多種類の抗原を検出できた。これらの基礎的データを基に、同一金粒子サイズのPAGを用いて第一抗原をPAGS染色法で、第二抗原をPAG染色法で検出する二重染色を試みた。その結果、第一染色の陽性部位には現像による金属銀の沈着が、また第二染色の陽性部位には金属銀の沈着のない金粒子の局在が観察された。しかしながら二種の反応産物の識別性、非特異的銀粒子の沈着の予防とこれに深く関わると思われるメッシュの選択の処理、最適金粒子サイズの決定、最適現像時間の検討など未だ解決しなくてはならない問題も多く残されているので、更に研究を継続し、最終的には電顕細胞学において最も一般的なglutaraldehydeosmium固定・Epon包埋による超薄切片で電顕免疫二重PAGS染色法を可能にしたいと考えている。

In the development of electroimmuno-duplex staining method, the effects of conventional optical PAGS staining method and the conditions for the development of PAGS staining method were discussed. This paper introduces the development of the double immuno-PAGS method based on the results of the double immuno-PAGS staining method. Two kinds of selection options for the target antigen are available, and the other options are available if necessary. In the electroimmunostaining method, a plurality of antigens were detected on the same section, and the selection of appropriate fixatives and embedding resins was necessary. In the PAG method and PAGS method, the types of fixatives and the selection of embedding resins were studied. As a result, the types of antigens were selected, and the differences in antigen detection properties were analyzed. The difference between the types of embedding resin and the type of resin used for embedding is very large. In addition, the use of LR-White and new resin embedding methods in immunocytochemistry and immunocytochemistry is not appropriate for comparison. The first PAG staining method and the second PAG staining method were used for the detection of gold particles. The results showed that the first staining positive site was found to contain metallic silver, and the second staining positive site was found to contain metallic silver particles. Identification of two kinds of reaction products, prevention of silver particle deposition, deep research on the selection of gold particles, determination of optimal gold particle deposition, investigation of optimal imaging time, and unresolved problems. Finally, the most common method of electrocytology is glutaraldehyde fixation, Epon embedding, and electroimmunostaining.

项目成果

Osamu Fujimori: "Effects of iodine pretreatment of sections upon immunogold-silver staining in light microscopic immunohistochemistry." Okajimas Folia Anat.Jpn.71. 319-324 (1994)

Osamu Fujimori：“切片碘预处理对光镜免疫组织化学中免疫金银染色的影响。”