トリパノソーマ科原虫の核酸生合成系酵素とグリコソームの生化学的解析

锥虫科原生动物核酸生物合成酶和糖体的生化分析

• 批准号: 06670271
• 负责人: 古島 理江子
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Juntendo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06670271/
• 关键词: ピリミジンde novo合成経路; Orotate phosphoribosyl transferase; Orotidine-5′-phosphate decarboxylase; glycosome; Trypanosoma cruzi

我々は核酸合成系の特にピリミジンde novo合成系がほとんどの生物に存在することから、その基本的な重要性に着目し研究を進めている。トリパノソーマ科原虫の本経路は他の生物同様6酵素の連続反応から成るが、第5・6の酵素Orotate phosphoribosyl-transferase(OPRT)とOrotidine-5´-phosphate decarboxylase(OMP-DC)は、他の生物の場合細胞質に存在するのに対し、本原虫に特異な細胞小器官グリコソームの膜に存在するといわれている。グリコソームは一重膜袋状構造をとり内部に解糖系酵素などが局在することから化学療法の標的として注目されているが、両酵素とグリコソームの詳細な報告は少ない。本研究は、両酵素の特性およびグリコソーム膜結合性を明らかにする目的で、Trypanosoma oruzi培養虫体を遠心分画し得られた画分の酵素学的解析、ショ糖密度勾配法後の画分の電顕観察、酵素活性測定を実施した。その結果、約75%の両酵素活性は膜画分に回収され、それらOPRT OMP-DCの酵素学的特性(Km値 至適pHなど)は酵母の両酵素の値と似ていた。この画分をショ糖密度勾配法により分画した結果、低いが両酵素活性を示す画分は、グリコソームの標識酵素であるヘキソキナーゼ活性を示した。この画分の電顕観察により、ほぼ均一な一重膜袋状構造物の存在を確認した。以上のことから、両酵素の特性が明らかになり両酵素のグリコソーム膜への結合性が強く示唆された。また、細胞分画により得られた膜画分の可溶化の条件を14種の可溶化剤を用いて検討したところ、NP40 1%とDOC 0.5%の条件がよく、活性は硫安画分40〜60%に回収された。両酵素の部分精製は検討中である。さらに、両酵素のグリコソーム膜上への局在を示すため、免疫電顕の実施を計画中である。

Our nucleic acid synthesis department's special laboratory The novo synthesis system is the existence of biology and the basic importance of research and research.トリパノソーマfamily protozoa の本経路はhis 6 enzymes の连続ynereaction から成るが、The 5th and 6th enzyme Orotate phosphoribosyl-transferase(OPRT)とOrotidine-5´-phosphate decarboxylase (OMP-DC), it exists in the cytoplasm of other organisms, and it exists in the membrane of small organs of cells specific to the protozoa.グリコソームはOne layer membrane bag-like structure をとり internal glycolytic enzyme などがburo in することからchemistry The target of the treatment is the attention of the patient, and the enzyme enzyme is the detailed report of the patient. The purpose of this study is to determine the characteristics of the enzyme, its membrane-binding properties, and Trypanosoma. The oruzi cultured worms were analyzed by telecentric separation and enzymatic analysis, and the electrochemical observation of the separation after the sugar density blending method was carried out, and the enzyme activity was measured. As a result, about 75% of the enzyme activity was recovered from the membrane, and the enzymatic characteristics of the OPRT OMP-DC (Km value to the optimum pH) were similar to that of the yeast enzyme. The results of the sugar density blending method using the sugar density blending method and the low enzyme activity are shownす画分は、グリコソームのidentification enzyme であるヘキソキナーゼActivity をshows した. The existence of the uniform one-layer membrane bag-like structure has been confirmed by the この画分の电顕榳看により. The characteristics of the above-mentioned enzymes and enzymes are clear and strong. 14 kinds of solubilization conditions for cell separation and membrane separation, NP40 1% DOC 0.5% conditioned water, active sulfur dioxide and 40~60% recycled water.両The enzyme is partially refined and the enzyme is refined.さらに, 両Enzyme のグリコソーム on the membrane へのbureau is in をshow すため, immune electric 镕の実事を plan is である.