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ウェルシュ菌のθ-毒素産生機構の分子遺伝学的解析

产气荚膜梭菌Theta毒素产生机制的分子遗传学分析

基本信息

批准号：
06670293
负责人：
東雍
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06670293/
关键词：
C.perfringens Substance A Expression of θ-Toxin Molecular cloning

项目摘要

我々はウェルシュ菌には生理的条件下に極めて不安定な低分子量物質(a-物質)が一つの中心的な役割を果たすレギュロン様の病原因子産生調節機構が存在することを明らかにしてきた。これらの病原因子のうち、検出感度の最も高いθ-毒素の発現系を利用したa-物質のアッセイ系を考案して、a-物質の産生を調べてみると野生株は菌体外にもa-物質を放出(分泌)していることが明らかになった。また、a-物質の仮想産生系遺伝子をクローン化する試みとして、我々はまず、親株(PB6K株)からa-物質を産生するθ-毒素非産生突然変異株とa-物質を産生しないθ-毒素非産生突然変異株を分離した。両者を混合培養したり、前者の培養濾液を後者の生菌に加えるとθ-毒素を産生する。次に、前者の染色体DNAを適当な大きさの断片にして大腸菌〜ウェルシュ菌間のシャトルベクターにつなぎ、種々の条件で後者に導入する事を試みたが結局導入は成功しなかった。これはPB6K株に制限修飾系が存在しているためと考えられたので、オーストラリアのJ.I.Roodから制限修飾系の欠損したとみられる導入効率の極めて高いウェルシュ菌Strain 13ならびに彼らが作製したシャトルベクター,pJIR418を、農林水産大臣への申請という煩雑な手続きを経て6ヶ月後にようやく入手した。早速、Strain 13をニトロソグアニジン処理してa-物質を産生しないθ-毒素非産生株,♯12-9を分離した。現在、PB6K株由来のa-物質を産生するθ-毒素非産生株,a32株の染色体DNA断片をpJIR418ならびに我々が新たに構築したコンパクトなシャトルベクター,pT14(未発表)につないだハイブリドプラスミドを♯12-9株に導入してθ-毒素産生株を検索している。3〜5000個のコロニーを検索する予定で、現在までの所、まだθ-毒素産生株はクローン化できていない。

Under the physiological conditions of bacteria and bacteria, there is a clear evidence that there is a risk of instability, low molecular weight (a-molecular weight), low molecular weight (a-molecular weight) and low molecular weight (a-molecular weight). The highest sensitivity of the pathogen, the highest concentration of θ-toxin, the highest sensitivity, the highest, the highest. I want to know that there is a sudden change in the production of theta-toxin. in this way, I want to know that there is a sudden change in the production of a-toxin, a-toxin, a- After mixed culture and liquid culture, the bacteria were added to the mixture and θ-toxin was added to the former. In the case of the second and the former chromosome DNA, when the fragments of the bacteria were isolated, the bacteria were isolated from the bacteria, and the conditions were changed, the patients were registered as successful candidates at the end of the test. There are some problems in the limited repair system of the PB6K plant, such as the control of the bacteria, the maintenance of the bacteria, the maintenance of the bacteria, the infection of the bacteria, the bacteria Strain 13, the bacteria, the bacteria, the bacteria, PJIR418 and the minister of agriculture, forestry and water supply have applied for the application of a mobile phone. Six months later, they will start to pay for it. In the early stage, Strain 13 was used to treat the virus, and 12-9 was isolated from the plant. At present, PB6K strain is derived from non-mycotoxin plants, A32 strains of chromosomal DNA fragments, pJIR418 fragments, I, and pT14 (not shown in the table), 12-9 strains were introduced into the plant of θ-toxin. There are 3 to 5000 customers who are scheduled to be registered, are now in the hospital, and have theta-toxin-producing plants that can be used to market their products.