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ヒトヘルペスウイルス6型初感染の早期診断法開発に関する研究

人类原发性疱疹病毒6型感染早期诊断方法的研究进展

基本信息

批准号：
06670838
负责人：
浅野喜造
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Fujita Health University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06670838/
关键词：
HHV-6 突発性発疹症早期診断 PCR 抗血清凝集反応ラテックス粒子

项目摘要

HHV-6初感染の特異的かつ簡易な早期診断法の開発および突発疹患児のウイルス排泄成績より至適診断材料の特定を検討し次の結果を得た。1)本学で分離したHHV-6 FG-1株を臍帯血単核球を用い大量培養。培養上清および超音波処理した感染細胞よりウイルスを精製。培養上清の超遠心沈渣を35%sucrose,30-50% sucrose gradientを用い超遠心、ウイルスを精製した。最終産物の電子顕微鏡観察ではnaked particleが多くみられenveloped particleは少数であった。同検体をSDS-PAGE,Western blotで検討したところ精製の過程とともににウイルス特異蛋白に減少傾向がみられた。感染細胞は超音波処理後、粗遠心上清を接種材料とした。2)精製接種材料をFreund's complete adjuvantとともに家兎、モルモットに4回接種、10週後に全採血。IF法により40から>2560のHHV-6特異抗体を持つ抗血清が作製された。3)Protein Aによるアフィニテ-精製と非感染臍帯血単核球による吸収によりHHV-6特異抗体を含むIgG分画を採取。IF法により1000のHHV-6特異抗体を持つこと判明。4)ラテックス試薬と抗体の吸着条件、各種濃度のウイルス液を用い凝集反応を指標とし至適ウイルス検出システムを検討した。モルモット由来のIgG、ラテックス試薬0.2-0.5mg/ml、ウイルス液を100-1000倍(10^<2.0>-10^<3.0>TCID_<50>/ml)の条件で特異的と思われる凝集像を観察できた。5)突発疹患児より経時的に採取した血液、尿、便、咽頭拭い液中のHHV-6 DNAをnested polymerase chain reaction法により検討した結果、有熱期早期の血液が早期診断に適した検体であるとの結論を得た。以上の成績より突発疹の検査による早期診断は可能と考えられる。

Development of a simple method for early diagnosis of HHV-6 primary infection and excretion of HHV-6 in patients with sudden onset. 1) HHV-6FG-1 strain isolated in this study was cultured in large quantities with umbilical cord blood. Culture supernatant and ultrasonic treatment of infected cells Supercenter of culture supernatant 35% sucrose, 30 -50% sucrose gradient The final product is observed by electron microscopy. There are many naked particles and a few enveloped particles. SDS-PAGE,Western blot analysis and purification of the same protein. Infected cells were treated with ultrasound, and the supernatant was inoculated with the material. 2)Refined inoculation material: Freund's complete adjuvant, 4 rounds of inoculation, 10 weeks later, whole blood collection IF method: HHV-6 specific antibody is prepared by using antiserum. 3)Protein A is purified from non-infected umbilical cord blood, and HHV-6 specific antibodies are extracted from the serum. IF method to detect 1000 HHV-6 specific antibodies. 4) The adsorption conditions of antibody, the aggregation reaction index of various concentrations of antibody and the appropriate antibody concentration are discussed. The IgG, IgG and IgG from the origin of the virus were detected at 0.2-0.5mg/ml and 100-1000 times (10^<2.0>-10 ^<3.0>TCID_<50>/ml). 5)HHV-6 DNA in blood, urine, feces and throat swabs was detected by nested polymerase chain reaction method at early stage of fever. The above results indicate that early diagnosis of sudden onset may be possible.