破骨細胞表面を認識するモノクローナル抗体の走査型電顕による免疫組織化学的研究

使用扫描电子显微镜对识别破骨细胞表面的单克隆抗体进行免疫组织化学研究

• 批准号: 06671818
• 负责人: 永田 健吾
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06671818/
• 关键词: 破骨細胞; 細胞分化; 免疫組織化学; 反射電子像

破骨細胞の分化に関する形態学的研究は骨芽細胞を始めとする間質細胞と破骨細胞の相互作用など数多く報告されている。しかし単一切片による観察では破骨細胞が非常に大型の細胞であるために組織内における各細胞の相互関係の詳細には理解しにくい。そこで本研究は走査型電子顕微鏡(SEM)と免疫組織化学的手法を組み合わせて電顕レベルの微細構造と光顕レベルの広範囲な視野の観察を試みた。新生仔ラットの腹腔にモノクローナル抗体Kat1(当教室で作成、培養系で破骨細胞様細胞の細胞膜表面を認識)を投与し、翌日固定,脱灰終了後OCTコンパウンドに包埋6μmの凍結連続切片(脛骨)を作成した。Kat1抗体の分布状態を可視化するために免疫組織化学(イムノゴールド法)を行いSEM観察用の試料とした。観察した部位は破骨細胞が多く存在している脛骨の骨端軟骨付近の骨梁である。Kat1の染色部位は標識した金コロイドの反射電子像で容易に観察することができた。同部位を二次電子像で観察すると大型の細胞(破骨細胞)の背側面の細胞膜表面や基底部の刷子縁に陽性像が見られた。本研究で応用した連続切片による免疫SEM法は細胞の機能状態を反映する特異抗体の分布状態を反射電子像で観察し、通常の二次電子像と組み合わせて解析する有効な方法である。今後はKat1抗体ばかりでなく既知の抗体を用いることによって破骨細胞を含む骨組織についての総合的な理解を深めることが必要である。

A morphological study of osteoclast differentiation has been reported on the interaction between osteoclast and mesenchymal cells. A detailed understanding of the relationship between osteoclasts and cells in tissues is presented. In this study, we investigated the microstructural and optical characteristics of the tissue by scanning electron microscopy (SEM) and immunohistochemical techniques. The antibody Kat1(which was prepared in the classroom and recognized on the cell membrane surface of osteoclast cells in the culture system) was injected into the abdominal cavity of newborn rats, fixed the next day, and prepared frozen sections (tibia) embedded in 6μm at the end of deashing. The distribution of Kat1 antibodies was visualized by immunohistochemistry and examined by SEM. There are many osteoclasts in the tibia cartilage near the bone beam Kat1's staining site is easy to detect by reflecting electron images. The secondary electron images of the same site were observed on the surface of the cell membrane on the back surface of large cells (osteoclasts) and on the brush positive images at the base. In this study, immunoSEM was used to reflect the functional status of cells, to observe the distribution of specific antibodies, to analyze the composition of common secondary electron images, and to analyze the distribution of specific antibodies. In the future, it is necessary to understand the use of Kat1 antibody in osteoclasts and bone tissue.