軟骨細胞に特異的に発現するコンカナバリンA受容体の構造と生理的機能の解析

软骨细胞特异表达的刀豆球蛋白A受体的结构和生理功能分析

• 批准号: 06671859
• 负责人: 笛吹 恵美子
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06671859/
• 关键词: 軟骨細胞; P76

軟骨細胞の分化成熟の制御機構において76KDaのConA結合蛋白が担う生理的機能を解明するために、本年度は特にこの蛋白のcDNAクローニングを行なって一次構造を決定することを主目的として行ない,以下の成果が上がった。1.内部アミノ酸配列の決定ウサギ肋軟骨から膜蛋白を調整し,WGカラム,ConAカラムで部分精製したサンプルをFPLCで精製した。一部をカルボキシメチル化後,トリプシン処理を行ないスマートシステムでペプチド断片を分離し,アミノ酸シーケンスを行なった。その結果,4種のフラグメントから内部シーケンスの情報がわかりメラノトランスフェリンとのホモロジーが高かった。2.抗体作製精製した残りの蛋白をマウスに免疫し抗体を作った。これは今後の実験に使用する予定である。3.cDNAクローニング内部アミノ酸配列の結果から4コのPrimerを作製しPCRで増幅した結果680bpのPCR産物が得られた。これをTAベクターに組み込みプローグとして使用し、ウサギ肋軟骨のcDNAライブラリーをスクリーニングして数回のクローンを得た。現在cDNAシーケンスを行なっているところである。4.ウエスタンブロッティングで臓器分布を調べた結果,P76は軟骨細胞に特異的に存在することを示した。5.軟骨細胞をP76抗体で染色し,共焦点レーザー顕微鏡で観察したところ,細胞膜に存在する蛋白であることが確認された。本年度の研究成果は日本生化学会(1994年9月於大阪)において発表し,現在論文投稿中である。

The 76KDa ConA-binding protein plays a physiological role in the regulation of chondrocyte differentiation and maturation. This year, the cDNA sequence of this protein was determined. The following results were obtained. 1. The internal acid alignment determines whether the costal cartilage and membrane proteins are adjusted,WG and FPLC are partially refined. After a part of the game is finished, the game will be played. As a result, 4 kinds of information are available in the interior of the building. 2. Antibody production and purification This is the first time I've ever seen a woman. 3. cDNA sequencing results showed that the Primer of 4 bp was amplified and the PCR product of 680bp was obtained. This is the first time I've ever seen a person who's been in a relationship with someone who's been in a relationship with someone else. Now the cDNA is in the pipeline. 4. The results of adjusting the distribution of cartilage receptors show that P76 exists specifically in cartilage cells. 5. Chondrocytes were stained with P76 antibody, and the presence of protein in the cell membrane was confirmed by confocal microscopy. The results of this year's research were presented by the Japan Biochemical Society (Osaka, September 1994) and are currently being submitted.

项目成果

Usui,E: "Rat Hepatic 3α-Hydroxysteroid Dehydrogenase:Expression of cDNA and physiological function in bile acid biosynthetic pathway." J.Biochem.115. 230-237 (1994)

Usui，E：“大鼠肝脏 3α-羟基类固醇脱氢酶：胆汁酸生物合成途径中的 cDNA 表达和生理功能。J.Biochem.115（1994）。”