P. loescheiiのgly-proペプチダーゼ遺伝子のクローニング

P. loescheii 甘氨酸肽酶基因的克隆

• 批准号: 07672029
• 负责人: 早川 光央
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Nihon University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-07672029/
• 关键词: prevotella loescheii; gly-pro aminopeptidase; λ ZAP Express; 歯周病; クローニング

◆歯周病関連菌のglycyl-prolyl aminopeptidase(GPase)は、申請者らのグループによって初めてP. gingivalisから分離・精製され、その後の研究により他の多くの歯周病関連菌も持っていることが解ってきた。特に、Prevotella loescheiiでは菌培養液および菌体内に非常に高い活性が認められ、しかもP. gingivalisのものとは性状を異にするものであることが判明した。本酵素のビルレンス因子として、細菌性コラゲナーゼとの共同作用によって結合組織の主要な成分、コラーゲンの破壊に関わっている可能性が示唆されており、グループの安孫子の本年度の別の報告書(一般研究 C)中に述べられている。◆7年度中に得られた研究結果はおおよそ計画のように進行しており、次の通りである。1.P. loescheii染色体DNAの精製と制限酵素による部分消化およびサイズ分画。サイズ分画は従来のショ糖グラジェント法よりも短時間で簡便なアガロースゲル電気泳動法を確立する事が出来たので短報での投稿を準備中である。2.in vitroパッケージング計画ではコスミドを使って遺伝子バンクをつくる予定であったが、ファージの新しいタイプ(λ ZAP Express)に変更した。このファージは10以上のクローニングサイトを有し,多種の制限酵素を使える点であり、部分消化の片寄りを制限酵素の種類を変えることにより解消出来るとの考えである。PstIを用いたファージバンクからGPase活性をもつクローンが一つ得られた。しかし、DNA分析により10kbと長く高発現性プラスミドでは不安定であった。3.酵素の精製と酵素学的知見GPaseの精製は現在産生量が低く単一標品を得るに至っていない。また、酵素学的性質は粗酵素で検べたところ、ほぼP. loescheiiのものの性状に近似した結果が得られた。以上の段階であるが、現在クローンの安定化を図っており、成功すれば一挙にタンパク質およびDNAの解析が出来るところに来ており、投稿準備を急いでいる。

◆ Glycyl-propyl aminopeptidase(GPase) from periodontal disease-related bacteria, applicants, and applicants Gingivalis is isolated, purified and studied in the future. Special, Prevotella loescheii Gingivalis is a very different species. The possibility of the enzyme's interaction with the major components of the binding tissue, the bacterial protein, and the enzyme's degradation is shown in this year's report (General Study C).◆7 years in the middle of the study results are not planned to carry out, the second time through the 1.P. loescheii chromosome DNA purification and restriction enzyme analysis In the process of preparing for the submission of short articles, the method of electronic motion is established in a short time. 2.in vitro More than 10 kinds of restriction enzymes are available. Some of them are restricted enzymes. PstI is used to detect GPase activity. DNA analysis is 10kb long and highly reactive. 3. Enzyme purification and enzymology knowledge GPase purification and production from low to medium standard The nature of enzyme science is the nature of crude enzyme. Loescheii's character is similar to that of the original. The above stages are now in the process of stabilization, success, quality and DNA analysis, and submission preparation.