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プロトンポンプ阻害薬の視覚障害惹起可能性の検証

验证质子泵抑制剂引起视力障碍的可能性

基本信息

批准号：
07672457
负责人：
漆谷徹郎
金额：
$ 1.34万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は,プロトンポンプ阻害薬オメプラゾールの視覚障害惹起可能性を検証するため,ウサギ毛様体非色素性上皮細胞にH,K-ATPase様蛋白が存在しているという過去の報告を追試し,毛様体非色素性上皮細胞におけるH,K-ATPase様蛋白の機能,およびそのオメプラゾールによる抑制が観察されるかどうかを検討することであった.ウサギ胃粘膜からH,K-APTaseを精製し,多くのマウスを免疫してポリクローナル抗体を作成し,更にこれらのマウスの脾細胞をミエローマと融合させて,モノクローナル抗体を作成した.いずれのポリクローナル抗体も,H,K-ATPaseのα・βサブユニットを認識したが,モノクローナル抗体は,H,K-ATPaseのαサブユニットのみを認識した.しかしながらFainらの報告と異なり,いずれの抗体も,ウサギ毛様体上皮細胞を特異的に免疫染色することはなく,ウェスタンブロット解析によっても,抗体陽性のバンドは認められなかった.ただし,毛様体上皮細胞の可溶性画分中,H,K-ATPaseのα・βサブユニットとは異なる,約70kDaのバンドを認識する抗体が1種のみ得られた.これは毛様体上皮細胞に,H,K-ATPaseとエピトープが共通する蛋白が存在する可能性を示し,現在この蛋白の一次構造を解析中である.毛様体上皮細胞に機能的H,K-ATPase様酵素が存在する可能性を探るため,急性単離したウサギ毛様体上皮細胞にpH感受性色素BCECFをロードし,Argus-50画像解析装置を用いて細胞内pHを測定した.毛様体上皮細胞は,塩化アンモニウム負荷や炭酸脱水酵素阻害薬で細胞内pHが低下したが,オメプラゾールによっては変化がなく,毛様体上皮にオメプラゾール感受性眼房水分泌があることを示唆する結果は得られなかった.糖尿病モデルラットを用いる実験の基礎検討として,ラットよりH,K-ATPaseを精製し,モノクローナル抗体を作成したが,ポリクローナル抗体の段階でも,毛様体上皮中の蛋白を認識しなかった.以上のことから,プロトンポンプ阻害薬オメプラゾールが視覚障害を惹起する可能性があるとしても,毛様体上皮細胞が作用点である可能性は薄いと考えられた.

The purpose of this study is to investigate the possibility of causing visual impairment by detecting the presence of H,K-ATPase protein in non-pigmented epithelial cells of human hair and to investigate the function of H, K-ATPase protein in non-pigmented epithelial cells of human hair. The purification of H,K-APTase from gastric mucosa, the preparation of antibodies against multiple immune systems, and the preparation of antibodies against multiple immune systems from spleen cells. In the middle of the spectrum, the α·β-ATPase of H, K-ATPase is recognized as the α-ATPase of H,K-ATPase. The antibody was detected by immunostaining specific to hair epithelial cells. In the soluble fraction of human hair epithelial cells,H, K-ATPase α·β-ATPase was identified as a 70kDa antibody. The possibility of the existence of a common protein in human hair epithelial cells was demonstrated, and the primary structure of the protein was analyzed. To explore the possibility of the existence of functional H,K-ATPase enzymes in human hair epithelial cells, and to determine the intracellular pH of human hair epithelial cells using an Argus-50 profile analyzer. The epithelial cells of the trichomes are under chemical stress and are inhibited by carbonic acid dehydratase. The pH in the cells is lowered. The epithelial cells of the trichomes are under chemical stress and are sensitive to aqueous humor secretion. Basic research on diabetes mellitus, purification of H,K-ATPase, preparation of anti-diabetic antibodies, identification of protein in hair epithelium. The possibility of causing visual impairment is discussed above, and the possibility of hair epithelial cells acting on the site is discussed below.