多能性獲得・維持におけるRNAメチル化によるncRNAの安定化及び生成制御の役割

RNA 甲基化对 ncRNA 稳定和生产控制在多能性获得和维持中的作用

• 批准号: 15H06444
• 负责人: 岡下 修己
• 金额: $ 0.92万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2015
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2015-08-28 至 2016-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15H06444/
• 关键词: RNAメチル化; Nsun2; Dnmt2; 胚性幹細胞; 多能性; non-coding RNA

non-coding RNA（ncRNA）はES細胞の自己複製能及び多分化能に重要な役割を果たしている。近年、ncRNAはメチル化修飾を受けることによって細胞内で安定化されることが分かってきた。しかし、ES細胞の自己複製能及び多分化能にncRNAの安定化が果たす役割は不明であった。そこで、未分化なES細胞で発現が高いRNAメチル化酵素であるNSUN2に着目し、NSUN2によるRNAメチル化を介したncRNAの安定化が、ES細胞の自己複製能及び多分化能に関わっているのか検証を行った。CRISPR/Cas9システムによりNsun2欠損ES細胞の樹立を行ったところ、Nsun2欠損ES細胞では形態的な変化はなく、長期にわたり未分化性を維持していた。一方、ES細胞の多分化能に対する機能を明らかにするため、Nsun2欠損ES細胞をLIF非存在下で培養した結果、Nsun2欠損による影響は観察されなかった。以上の結果より、Nsun2によるメチル化を介したRNAの安定化はES細胞の自己複製能及び多分化能に重要ではない可能性が示唆された。しかし、Nsun2欠損ES細胞ではNSUN2と同様にRNAメチル化活性を有するDNMT2が発現しており、RNAの安定性に寄与している可能性がある。そこで現在、CRISPR/Cas9システムを用いてNsun2及び Dnmt2を両方とも欠損したES細胞の作製を行っている。Nsun2/Dnmt2欠損ES細胞の樹立ができ次第、ES細胞の自己複製能及び多分化能とncRNAの安定化の関係性を解析する。

Non-coding RNA (ncRNA) plays an important role in ES cell replication and differentiation. In recent years, ncRNA has been modified to stabilize cells. The ability of ES cells to replicate and differentiate themselves is unknown. In addition, undifferentiated ES cells develop high levels of RNA-mediated enzymes such as NSUN 2, NSUN 2, and ncRNA stabilization. ES cells also develop replication and differentiation related enzymes. CRISPR/Cas9 is the first to establish Nsun 2 deficient ES cells. Nsun 2 deficient ES cells are morphologically differentiated and remain undifferentiated for a long time. The effect of Nsun 2 deficiency on the differentiation ability of ES cells in the absence of LIF was investigated. The above results suggest that stabilization of RNA mediated by Nsun2 may be important for ES cells 'own replication and multiple differentiation capabilities. NSUN 2-deficient ES cells have the same RNA activity as NSUN 2, so it is possible for DNMT 2 to develop and RNA stability to be maintained. The CRISPR/Cas9 gene is used in the production of Nsun 2 and Dnmt 2. Analysis of the relationship between Nsun2/Dnmt2 deficient ES cell proliferation, ES cell replication and ncRNA stabilization