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脊髄損傷治療に向けた幹細胞由来エクソソームの大量精製技術の開発

开发用于治疗脊髓损伤的干细胞源性外泌体的大规模纯化技术

基本信息

批准号：
16H06844
负责人：
西田英高
金额：
$ 1.91万
依托单位：
Gifu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2016
资助国家：
日本
起止时间：
2016-08-26 至 2018-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16H06844/
关键词：
エクソソーム再生医療間葉系幹細胞脊髄損傷

项目摘要

本研究申請者は、脊髄損傷の新たな治療技術を開発することを目的に、間葉系幹細胞が分泌するエクソソームに着目し、研究を進めている。エクソソームの回収法は超遠心法や沈殿法などの方法が用いられているが、これらの方法では治療に必要なエクソソーム量を回収することが困難であり、大量に回収する技術の構築が必要である。また、エクソソームにも様々なタイプが存在することが明らかとなりつつあり、これらの中で治療効果のあるエクソソームの分離が重要である。申請者はヒト骨髄間葉系幹細胞を無血清培地を用いて細胞が生存することを確認し、培養上清中のエクソソームをカラムクロマトグラフィー法を用いて回収および濃縮することに成功した。また、エクソソームを定量するためのサンドイッチELISAを開発し、定量を行った。さらに溶出条件の違いによって２種類のエクソソームに分類することが可能であった。現在、これらのエクソソームの特性をウエスタンブロット法およびリアルタイム定量PCRを用いて、分析を行っている。また、これらのエクソソームの効果について、動物モデルを用いて検討を行っている。次にイヌ骨髄間葉系幹細胞を用いて無血清培地を用いてエクソソームの回収を試みたが、多くの細胞が死滅したため、ヒトとは異なる培養条件が必要であることが明らかとなった。犬由来の１％血清を添加することによって、細胞死を抑制することが可能であった。また、培養上清中のエクソソームの存在をウエスタンブロット法を用いて明らかにした。現在、イヌの培養上清中のエクソソームをカラムクロマトグラフィー法を用いて回収および濃縮することが可能か検討を行っている。

The applicant of this study intends to develop new therapeutic techniques for spinal cord injury, and to further research on the secretion of mesenchymal stem cells. It is difficult to reconstruct the necessary amount of treatment by using the method of recovery, especially the method of remote center and deep center. It's important to have a clear understanding of the nature of the problem and to have a clear understanding of the problem. The applicant has successfully cultivated mesenchymal stem cells in serum-free medium. The ELISA was developed and quantified. The dissolution conditions are different from those of the 2 species. Now, the characteristics of this software are discussed in detail. Quantitative PCR is used for analysis. In the case of animals, it is necessary to investigate the effects of the treatment. The cells were cultured in serum-free medium. 1% of the dog's serum is added to the cell. In addition, the existence of exosomes in the cultivation of supernatant fluid will be clearly demonstrated through the use of the ESSTANBRO method. Now, in the culture supernatant, we can use the method of recovery and concentration to discuss the problem.