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細胞接着因子Saaの腸管出血性大腸菌感染症の重症化への寄与及び病原性機構の解明

阐明细胞粘附因子Saa对肠出血性大肠杆菌感染严重程度的影响及致病机制

基本信息

批准号：
22K20766
负责人：
窪村亜希子
金额：
$ 1.83万
依托单位：
National Institute of Infectious Diseases
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-08-31 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

所内に保管される過去15年分の腸管出血性大腸菌（EHEC）のうち細胞付着関連遺伝子saaを保有している可能性があるO血清群に属する312株のEHECを対象に全ゲノム（WGS）解析を実施し、90株からsaaを検出した。90株のうち重症例である溶血性尿毒症症候群 (HUS）患者由来株であった8株は、追加でロングリードシークエンス解析を行うことで完全長配列の決定も行った。90株のsaa保有EHECについて、マンノース添加培地を使用したHEp-2細胞への付着性試験を実施し、そのうちHUS患者由来株8株についてはマンノース不含による条件での付着性試験も実施した。細胞付着性試験の結果から、90株のうち7株で細胞付着性を示し、そのうち2株はHUS患者由来株であった。なお、マンノース有無のいずれの条件でも同じ2株が細胞への付着性を示した。さらに、細胞に付着したHUS患者由来株2株について、saa破壊株を作製した。しかし、saa破壊株を供試した細胞付着性試験結果では、いずれの2株においても細胞への付着が確認された。Saaについては、主要なO血清群（O157、O26、O111など）に属するEHECからは検出されないため、saa保有EHEC株は希少であることなどからSaaの細胞付着状況については国内外においても十分な株数の調査は実施されていないが、本研究結果からsaa保有EHEC株のHEp-2細胞への付着率は7.8%程度であることが確認された。しかし、作製した2株のsaa破壊株が細胞付着性を示したことから、saa保有株であってもSaa以外の因子により細胞付着性を示す株が一定数存在することが示唆された。Saaについては、細胞付着形態による付着因子の特定も困難であるため、Saaが起因する細胞付着率については、全付着株を対象に分子生物学的等の手法による追加解析を行う必要性があると考えられた。

All EHEC strains collected in the past 15 years have been analyzed for the presence of associated gene saa, and 312 EHEC strains belonging to serogroup O have been identified. 90 strains of severe hemolytic uremic syndrome (HUS) patients from the strain, 8 strains, additional analysis of the line, complete long alignment of the decision line 90 strains of saa retain EHEC and are used in HEp-2 cell culture. 8 strains of saa retain EHEC and are used in HEp-2 cell culture without EHEC. Cell adhesion test results: 90 strains, 7 strains, cell adhesion test results, 2 strains, HUS patient origin test results The condition of cell adhesion is the same as that of cell adhesion. 2 strains of HUS were isolated from the cells, and 2 strains of saa were isolated from the cells. The results of the cell viability test of the tested saa strains were confirmed by two cell viability tests The results of this study confirm that the cell survival rate of HEp-2 cells with saa retaining EHEC strain is 7.8%. 2 saa strains were found to have cell adhesion factors other than Saa, and a number of saa strains were found to have cell adhesion factors. Saa, cell adhesion morphology, cell adhesion rate, total adhesion strain, molecular biology, etc., need for additional analysis.