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Genetic profiling of FAP-positive cancer-associated fibroblasts and exploratory studies for personalized therapy

FAP 阳性癌症相关成纤维细胞的基因分析和个性化治疗的探索性研究

基本信息

批准号：
22K20825
负责人：
賀島肇
金额：
$ 1.83万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-08-31 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

2023年5月までに未治療の食道扁平上皮癌8症例から検体を採取し，がん組織のオルガノイド作成および線維芽細胞の初代培養を行っている．食道がん患者由来のCAFsの抽出とのゲノム解析：採取した検体のうち線維芽細胞の初代培養成功率は87.5%（7/8）であった．一部の検体で感染のため培養が不成功に終わったが，成功率としては良好であった．本格的なゲノム解析は未施行であるが，個々の症例についてがん関連線維芽細胞（Cancer associated fibroblasts: CAFs）特異的マーカーであるFAPやα-SMA，細胞外基質の構築に関わるcollagenタンパクやマトリックスメタロプロテアーゼの発現を免疫染色やimmunoblotでまずはプロテオミックに評価している．食道がん患者由来のオルガノイドライブラリ構築と個別化治療にむけた実験：採取した検体のうち食道扁平上皮癌オルガノイドの樹立成功率は62.5%(5/8)であった．ライブラリの目標検体数には達している．手技が確立された腺癌オルガノイドと比較して扁平上皮癌オルガノイドの樹立成功率は，71.4%(Kijima et al.2018. CMGH)ともともと低く，開始初期の手技的問題があったことも考慮すると妥当な確率と考えられる．症例の蓄積により成功率の増加が見込まれる．また近傍の正常食道扁平上皮組織からもオルガノイド作成を行っているが，こちらは樹立成功率が87.5%（7/8）とがん組織より高かった．個々の症例ごとにオルガノイドをゲル内で固定しパラフィン包埋切片を作り，H&E染色およびP53やKi63の免疫染色を行うことでそれぞれの特徴を評価し層別化を試みている．オルガノイドの樹立に成功した症例の多くは現在術前化学療法中であり，今後手術加療が行われた際に切除検体の評価を行い腫瘍の特性や術前治療効果判定などを行う予定である．

In May 2023, 8 cases of untreated esophageal squamous cell carcinoma were collected, and the primary culture of vascular bud cells was carried out. The successful rate of primary culture of CAFs from esophageal cancer patients was 87.5%(7/8). A part of the infection and culture is unsuccessful, the success rate is good. The analysis of this case has not been performed. In each case, FAP and α-SMA are specific to Cancer associated fibroblasts (CAFs). The construction of extracellular matrix is related to collagen and immunoblot. The success rate of establishing the diagnosis of esophageal squamous cell carcinoma was 62.5%(5/8). The number of target objects in the category is not reached. The success rate of establishing adenocarcinoma was 71.4% compared with squamous cell carcinoma (Kijima et al.2018. CMGH) The accumulation of symptoms and the increase of success rate are also observed. The success rate of normal esophageal squamous epithelium tissue was 87.5%(7/8). For each case, fixed and paraffin-embedded sections were made in the head and neck, and H&E staining and immunostaining for P53 and Ki63 were performed. The characteristics of these sections were evaluated and stratified. Many successful cases were found in preoperative chemotherapy, and the characteristics of tumor selection and preoperative treatment outcome were determined in future surgical treatment.