Genetic profiling of FAP-positive cancer-associated fibroblasts and exploratory studies for personalized therapy

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2023年5月までに未治療の食道扁平上皮癌8症例から検体を採取し，がん組織のオルガノイド作成および線維芽細胞の初代培養を行っている．食道がん患者由来のCAFsの抽出とのゲノム解析：採取した検体のうち線維芽細胞の初代培養成功率は87.5%（7/8）であった．一部の検体で感染のため培養が不成功に終わったが，成功率としては良好であった．本格的なゲノム解析は未施行であるが，個々の症例についてがん関連線維芽細胞（Cancer associated fibroblasts: CAFs）特異的マーカーであるFAPやα-SMA，細胞外基質の構築に関わるcollagenタンパクやマトリックスメタロプロテアーゼの発現を免疫染色やimmunoblotでまずはプロテオミックに評価している．食道がん患者由来のオルガノイドライブラリ構築と個別化治療にむけた実験：採取した検体のうち食道扁平上皮癌オルガノイドの樹立成功率は62.5%(5/8)であった．ライブラリの目標検体数には達している．手技が確立された腺癌オルガノイドと比較して扁平上皮癌オルガノイドの樹立成功率は，71.4%(Kijima et al.2018. CMGH)ともともと低く，開始初期の手技的問題があったことも考慮すると妥当な確率と考えられる．症例の蓄積により成功率の増加が見込まれる．また近傍の正常食道扁平上皮組織からもオルガノイド作成を行っているが，こちらは樹立成功率が87.5%（7/8）とがん組織より高かった．個々の症例ごとにオルガノイドをゲル内で固定しパラフィン包埋切片を作り，H&E染色およびP53やKi63の免疫染色を行うことでそれぞれの特徴を評価し層別化を試みている．オルガノイドの樹立に成功した症例の多くは現在術前化学療法中であり，今後手術加療が行われた際に切除検体の評価を行い腫瘍の特性や術前治療効果判定などを行う予定である．