E. faecium特異的ファージ由来溶菌酵素を用いた新規急性GVHD制御法の開発

使用屎肠球菌特异性噬菌体来源的裂解酶开发一种新型急性 GVHD 控制方法

• 批准号: 22K20931
• 负责人: 林 哲哉
• 金额: $ 1.83万
• 依托单位: Osaka Metropolitan University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-08-31 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K20931/
• 关键词: 急性移植片対宿主病; バクテリオファージ; 腸内細菌叢

同種造血細胞移植(同種移植)後の主要な合併症である急性移植片対宿主病(GVHD)の病態における、腸内共生病原菌の候補であるE. faecium菌を特異的に溶菌可能なバクテリオファージ(ファージ)由来酵素を探索すべく、本研究を実施した。先行研究において実施した、大阪公立大学医学部附属病院血液内科・造血細胞移植科において同種移植を施行された患者の腸内細菌叢の解析結果を元に、Enterococcus属細菌の構成割合が相対的に増加している症例を抽出した。それらの症例の糞便中より、Enterocoocus属細菌を選択的に培養可能な培地を用いて単離した、計約150株程度のE. faecium菌株よりゲノムを抽出した。これらのゲノムを用いて次世代シークエンス用ライブラリを作成し、次世代シークエンサー(illumina Hiseq)によるショットガンシークエンスを実施した。スーパーコンピュータを用いて、えられたシークエンスデータをアセンブルし、えられたコンティグに対してプロファージ配列を同定した。このプロファージ配列に対し、ファージゲノムが持つ溶菌酵素として知られているエンドライシンのゲノム配列、及び溶菌活性ドメインや細胞結合ドメインを保持する新規溶菌酵素の候補となるタンパクのゲノム配列を網羅的に抽出した。得られた溶菌酵素のアミノ酸配列をクラスタリングし、特徴的な構造を持つタンパクを抽出した。以上の工程により、E. faecium特異的溶菌酵素の候補となるゲノム配列を複数同定した。これらのゲノム配列を含むプラミドベクターを作成し、大腸菌を用いてタンパクを合成した。結果として、E. faecium特異的溶菌酵素の候補となるタンパクを、一種類合成することに成功した。

Major complications after allogeneic hematopoietic cell transplantation (allotransplantation) Pathological changes in acute graft versus host disease (GVHD) Candidate intestinal symbiotic pathogens This study was carried out to explore the origin of faecium specific lysozyme. In the preceding study, the Department of Hematology and Hematopoietic Cell Transplantation, Osaka Public University School of Medicine, analyzed the intestinal bacterial flora of patients undergoing allotransplantation, and found that the composition of Enterococcus bacteria increased. In addition, Enterococus bacteria were isolated from feces of various cases, and about 150 strains of E. Faecium strains are required to be extracted. This is the first time that the world has seen such a phenomenon. The first time I saw him, I saw him. The new lysozyme candidate and the new lysozyme candidate are selected from the list of lysozyme candidates and the list of lysozyme candidates selected from the list of lysozyme candidates and the list of lysozyme candidates selected from the list of lysozyme candidates. The results show that the lysozyme can be isolated from the acid sequence, and the characteristic structure can be isolated from the acid sequence. The above works are, E. Faecium-specific lysozyme candidates must be aligned in multiple ways. This is the first time that the Chinese government has made a decision on whether to use the Chinese government to make a decision. Results: E. Faecium-specific lysozyme candidates are successful in the synthesis of a variety of enzymes.