唾液特異蛋白質ヒスタチン3を標的とするアプタマーを用いた新規唾液検査法の開発

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犯罪捜査における従来の唾液検査法は、食品等にも含まれるアミラーゼを検出する手法であるため特異性が比較的低く、新規検査法の構築が必要とされる。唾液中に分泌される抗菌ペプチドの一種であるヒスタチン3は特異性の高い新規唾液マーカー候補である。しかし、既存の抗体を用いたヒスタチン3検出手法には、手技が煩雑であり、かつヒスタチン3自体が低分子であるため高い検出感度を実現可能な抗体が入手困難であるという課題がある。そこで、アプタマーと呼ばれる、比較的小さい標的分子にも特異的に結合する性質をもち高感度な検出手法への応用が期待できる、オリゴヌクレオチド（DNA）に着目した。本研究では、ヒスタチン3に特異的に結合するアプタマーを用いて、唾液中のヒスタチン3を簡便かつ高感度に検出する手法を構築し、従来法の課題を克服した新たな法科学的唾液検査法の開発を目指す。初年度（2022年10月～2023年3月）は、蛍光標識したオリゴDNAを用いた常温下での自発的伸長反応（Hybridization Chain Reaction, HCR法）と蛍光検出器としてのリアルタイムPCR装置を用いた核酸検出系の構築を行った。検討の結果、枝分かれ構造を作るようにオリゴDNAを設計することで、より低濃度の核酸を検出することができることが分かった。この検出系は試料中に含まれる標的核酸（アプタマー等）の量を評価するために必要であり、系構築により、これにつづく配列改変アプタマー等によるヒスタチン3検出手法の構築に向けた検証作業の下準備が整った。