肺癌で過剰発現するチロシンキナーゼと機能の総合的解析と臨床標本における検出法確立

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我々は本研究を開始するにあたり、予備実験で、定量PCRにより非受容体型チロシンキナーゼであるFPS/FES Related Tyrosine Kinase(FER)が約1割の肺癌症例で過剰発現していることを明らかにし、またマウス繊維芽細胞でFERを強制発現させ癌化能を確認し、さらにFERが過剰発現した肺癌細胞株NCI-H661細胞でsiRNAによりFERをノックダウンするとアポトーシスが誘導されることを示していた。この結果をもとに、肺癌におけるFERの治療標的としての確立を目指して、本年度は、肺癌臨床検体でのFER過剰発現スクリーニング法の確立、及び、in vivoでの検討のための肺胞上皮特異的なFER強制発現トランスジェニックマウスの作成を行った。まず肺癌臨床検体でのFER過剰発現検出として、免疫染色法によるスクリーニング法の確立を目指した。過去の文献から、使用する抗体として数種類を用い結果を比較したが、最終的にLS Bio社の抗FER抗体（LS-B3467）が最適な染色結果を示した。この抗体を用いた免疫染色の結果をその染色の程度から3段階でスコア化したところ、定量PCRによる結果とほとんど一致することが確認できた。さらに、臨床背景を解析したところ、FERの過剰発現例ではそうでない症例に比べ、肺癌手術後の無増悪期間及び全生存期間が有意に短く、予後不良であることを見出した。肺胞上皮特異的FER過剰発現トランスジェニックマウスの作成については、まず肺胞上皮特異的であるSPCプロモーターの下流にFERをサブクローニングしたSPCプロモーター誘導性のFER発現プラスミドベクターを作成した。これをマウス胚に導入し、バッククロスにより得たF1マウスについて、臓器ごとにFER遺伝子の発現を解析したところ、FERの肺特異的な発現を確認でき、目的トランスジェニックマウスの作成に成功した。