エネルギー代謝調節因子は骨代謝を制御し、骨と糖代謝を結ぶ重要な因子となりうるか？

能量代谢调节因子能否控制骨代谢，成为连接骨与糖代谢的重要因素？

• 批准号: 24890129
• 负责人: 金沢 一平
• 金额: $ 1.91万
• 依托单位: Shimane University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012-08-31 至 2014-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-24890129/
• 关键词: AMPK; 骨芽細胞

骨芽細胞特異的AMPKノックアウトマウスを作製するプロトコールを作成し、島根大学の動物実験専門委員会と組み換えDNA実験についての申請を行い、許可を得た。その後、 AMPK flox/floxマウスとOsx-CreTG/+マウスを米国ジャクソン研究所より購入し、系統維持のためにマウスを繁殖させた。骨芽細胞特異的AMPKノックアウトマウスを作成するために、AMPK flox/floxマウスとOsx-CreTG/+を交配させ、AMPK flox/+;Osx-CreTG/+マウスを得た後に、再度AMPK flox/floxマウスと交配させ、AMPK flox/flox;Osx-CreTG/+マウスを得た。次に、AMPK flox/flox;Osx-CreTG/+マウスのgenotypingのprotocolを確立し、現在は系統維持のためにAMPK flox/flox;Osx-CreTG/+マウスを繁殖させているところである。2013年中には実験可能なようにAMPK flox/flox;Osx-CreTG/+マウスとAMPK flox/floxマウスを各6-10匹獲得し、観察を開始する予定である。その後は3カ月の飼育ののちに血液と骨組織の採取を行い、マイクロCT、骨組織標本、骨代謝マーカーの測定などの解析を行っていく予定としている。骨の表現型が確認できたところで、次に糖代謝についての検討をブドウ糖負荷試験、インスリン負荷試験などにて行っていく予定である。In vivoにおける表現型が確認できた後に、AMPK flox/flox;Osx-CreTG/+マウスより骨芽細胞と間葉系幹細胞の初代培養を行い、AMPK欠損による骨芽細胞の増殖能、分化・石灰化能などについて、分子レベルの検討を行う予定である。

The application for the establishment of a bone bud cell-specific AMPK system was approved by the Animal Science Committee of Shimane University. AMPK flox/flox Bone bud cell-specific AMPK flox/flox AMPK flox/flox;Osx-CreTG/+; its genotyping protocol is established; now it is maintained; AMPK flox/flox;Osx-CreTG/+; it is propagated; In mid-2013, 6-10 pieces of AMPK flox/flox;Osx-CreTG/+ AMPK flox/flox will be available, and the inspection will begin. After 3 months of breeding, blood and bone tissue sampling, CT, bone tissue, bone metabolism, determination, analysis and determination. The phenotype of bone is confirmed by glucose metabolism, glucose load test, glucose load test, glucose metabolism test, glucose metabolism test, In vivo, after phenotype confirmation, AMPK flox/flox;Osx-CreTG/+, bone bud cells and mesenchymal stem cells are cultured in primary culture, AMPK deficiency, proliferation, differentiation, calcareation, molecular metabolism, and molecular biology are determined.