ケミカルセレクションを用いた重度知的障害の治療薬の検索

使用化学选择寻找严重智力障碍的治疗药物

• 批准号: 24890304
• 负责人: 福原 弥生
• 金额: $ 1.91万
• 依托单位: Institute for Developmental Research, Aichi Human Service Center
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012-08-31 至 2014-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-24890304/
• 关键词: 脳神経疾患; 治療; 知的障害; 奇形症候群

Mowat-Wilson症候群 (MWS)は重度知的障害、特徴的な顔貌と小頭症を3主徴とする常染色体優性遺伝の疾患であり、第2番染色体長腕に座位するZEB2 (別名SIP1)遺伝子のハプロ不全により発症する。本研究ではZeb2-GFPレポーターノックインマウスの初代培養海馬神経細胞を用いたケミカルセレクションを行い、Zeb2の発現量を増加させる化合物の網羅的検索を行う。MWS患者の片方のアリルにある正常のZEB2発現量を増加させる化合物を同定できれば、同化合物の投与により重度知的障害の改善が期待される。本年度はケミカルセレクションを行う際の蛍光測定条件を確立するため、測定に用いる細胞数と蛍光強度との相関性を検討した。初めにZeb2-GFP cDNAを導入したHEK293細胞を用いて細胞数と蛍光強度の相関性を検討したところ、細胞数増加に伴い蛍光強度が直線性に増加し蛍光測定の感度と測定可能範囲が明らかとなった。次にZeb2-GFPヘテロマウス胎仔 (E17.5)から単離した初代培養海馬神経細胞を用いて同様の解析を行った。細胞は96 well plateで培養し、マイクロプレートリーダーを用いて蛍光強度を測定した。その結果、生細胞の状態では培養液をPBSに置換して測定を行っても野生型胎仔と比較して蛍光強度の差は見られなかった。そこで、細胞を固定した後、抗GFP抗体で染色して蛍光強度の増強を行ったところ、野生型胎仔と比較して細胞数増加（1X104-1X106 cells/well）に伴い蛍光強度が増加する傾向が見られた。しかし、本研究で用いた細胞数では野生型胎仔（コントロール）との蛍光強度の差が小さく、１well当り1X105個以上の細胞数が必要なことが明らかになった。従って、蛍光強度を増加する目的で、ホモマウス同士の交配により得られるホモマウスの胎仔海馬を用いた研究が示唆された。

Mowat-Wilson syndrome (MWS) has a severe known disorder, a special appearance, a microdisorder, an autosomal disorder, an autosomal sex disorder, a disease, a second chromosome, a long wrist position, a ZEB2 (alias SIP1), an incomplete disorder. In this study, Zeb2-GFP was used in the primary culture of the sea god cell, and the Zeb2 was added to the demand line of the compound network. In patients with MWS, there is no significant difference in the dosage of normal ZEB2, the same dose of compound, the severe known damage of the same compound and the improvement of expectation. This year, the number of cells, the number of cells, the intensity of light, the relative strength of light, the number of cells, the intensity of light and the conditions of photometry. The number of cells, the number of cells, the intensity of light, the intensity of light, the number of cells, the number of cells, the number of cells, For the second time, Zeb2-GFP the baby (E17.5) to separate from the original culture of the sea god cell with the same analysis. The cell is 96 well plate, and the temperature is measured by the intensity of the light. The results showed that the growth rate of wild-type fetus was higher than that of wild-type fetus, and the light intensity was lower than that of wild-type fetus. The results showed that the results showed that the cell-like culture solution was used to determine the difference of light intensity and light intensity. After the cells were fixed and fixed, the anti-GFP antibody staining showed that the light intensity was enhanced, and the wild type fetus was added to the number of cells (1X104-1X106 cells/well). In this study, we used the cell number of wild type fetus (wild type) to test the difference of light intensity and the number of cells of more than 1X105 in 1well. It is necessary to check the number of cells. The light intensity, the intensity of light, the purpose of mating, the strength of light, the intensity of light, the purpose of mating, the mating of the same scholar, the baby, the baby, the baby and the baby.