小型魚類を用いたシナプス可塑性のin vivoイメージング

使用小鱼进行突触可塑性的体内成像

• 批准号: 25890015
• 负责人: 松井 秀彰
• 金额: $ 1万
• 依托单位: University of Miyazaki
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
• 财政年份: 2013
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2013-08-30 至 2015-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-25890015/
• 关键词: 神経科学

AMPA-Rは、長期増強（Long-term potentiation: LTP）において、シナプス後膜においてその数が増加することが指摘されており、実際にシナプス可塑性の主要な一因を果たしていると考えられている。その数の増加は、同受容体の細胞内から細胞外への挿入とそれに続く側方拡散によってシナプス後膜に集積することによってなされる。つまりシナプス後膜に特異的に集簇したAMPA-Rを標識することでシナプス可塑性をモニターすることが可能である。そのためにシナプス後膜に存在し、AMPA-Rと複合体を形成するタンパク質PSD-95を利用した。PSD95の近傍にあるAMPA-Rのみを可視化することができれば、シナプス後膜特異的にAMPA-Rを半定量することが可能である。特定部位で切断したVenusの断片をそれぞれAMPA-R とPSD95 に結合させたものを作製し、HEK細胞やラットの初代神経細胞にそれらを共発現させた。AMPA-RとPSD95が近傍に位置し複合体を形成すれば、Venusタンパクが再構築され蛍光を発するはずである。初年度はHEK細胞ならびにラット神経初代培養細胞を用いて、chemical LTDおよびchemical LTPにてこのシステムが働くことを確認した。具体的にはsplit Venusを付属させたAMPA-RとPSD-95が神経細胞内で正常なlocalizationをとること、また両者がcolocalizationする箇所のみVenusの信号が確認される事を確認した。さらにVenusの切断部位を様々に検討し、LTDおよびLTPの同定に最適な切断部位を同定した。その結果chemical LTDおよびchemical LTPに対して鋭敏に反応する組み合わせを見いだす事に成功した。現在はゼブラフィッシュの樹立中である。

AMPA-R Long-term potentiation (LTP) increases in the number of membrane components that contribute to the plasticity of AMPA-R. The increase in the number of cells, the number of cells, the increase in the number of cells, the number of cells, the increase in the number of cells, the increase in the number of cells, the number of cells, the A special cluster of AMPA-R molecules may be identified as plasticity-dependent molecules. The existence of AMPA-R complex and the utilization of PSD-95 The AMPA-R in the vicinity of PSD95 can be visualized in a semi-quantitative manner. The fragments of Venus in specific sites were isolated from AMPA-R and PSD95, and were detected in HEK cells and primary neurons. AMPA-R and PSD95 are located near the complex, Venus is located near the complex, and Venus is located near the complex. HEK cell culture was confirmed by chemical LTD and chemical LTP. Specifically, split Venus is identified by AMPA-R and PSD-95 as a signal for normal localization and colocalization in neurons. The cutting position of Venus is the same as that of LTD and LTP. The results of chemical LTD and chemical LTP are as follows: Now, I'm going to have to do something about it.