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バイアスリガンドによるGPCRのシグナル伝達制御機構の解明

阐明偏向配体对 GPCR 信号转导的控制机制

基本信息

批准号：
26893041
负责人：
幸福裕
金额：
$ 0.92万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Research Activity Start-up
财政年份：
2014
资助国家：
日本
起止时间：
2014-08-29 至 2015-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

創薬標的分子として重要なGタンパク質共役型受容体 (GPCR) の一種であるβ2アドレナリン受容体 (β2AR) を、再構成高密度リポタンパク質（rHDL）の脂質二重膜に再構成した。これを用いて、様々な薬剤について、Gタンパク質およびアレスチンを介したシグナル伝達経路の活性化能を独立に定量するアッセイ系を構築した。β2ARのメチオニンメチル基を13C標識し、その周囲を2H標識した試料の調製に成功した。この試料を用いて界面活性剤ドデシルマルトシド中でのNMR解析をおこなった結果、β2ARの細胞内側に存在するM215由来のNMRシグナルを様々な薬剤結合状態で高感度に観測することに初めて成功した。アレスチンを介したシグナル伝達経路のみを選択的に活性化する薬剤であるカルベジロールが結合したβ2ARのNMR解析をおこなった。その結果、M215由来のNMRシグナルの化学シフトは、すべてのシグナル伝達経路を活性化する、通常のリガンドと異なっていることが分かった。カルベジロールを含む様々な薬剤について、M215由来のNMRシグナルの化学シフトと、Gタンパク質およびアレスチンを介したシグナル伝達経路の活性化能の対応を解析した。この結果から、β2ARはGタンパク質を選択的に活性化する構造とアレスチンを選択的に活性化する構造の平衡にあること、カルベジロール結合状態では、その平衡がアレスチンを選択的に活性化する構造に偏っていると結論した。

A kind of β2-AR receptor (GPCR) is used to reconstruct the lipid double membrane of high density lipoprotein (rHDL). The activity of the active pathway is independently quantified in the following ways:β2AR The results of NMR analysis of the sample using the interfacial active agent, the existence of M215 in the cell interior, and the initial success of the detection of the high sensitivity of the compound in the binding state The analysis of β2AR by NMR was carried out on the basis of the activation of the molecule. As a result, M215 is derived from NMR spectra, which are chemically and chemically activated, and usually separated from each other. The chemical composition of the M215-derived NMR spectrum, the chemical composition of the M215-derived NMR The results show that β2AR is the most active structure in the world, and the most active structure in the world.