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Significance of glycoconjugate remodeling by fish sialidase localizing at nucleus

位于细胞核的鱼类唾液酸酶对糖缀合物重塑的意义

基本信息

批准号：
22H02436
负责人：
塩崎一弘
金额：
$ 11.4万
依托单位：
Kagoshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2026-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22H02436/
关键词：
シアリダーゼカラシン目核シアル酸 Neu4 核局在

项目摘要

当該年度では、核局在型シアリダーゼNeu4の核局在メカニズムの解明を中心に行った。カラシン目魚類であるメキシカンテトラからNeu4遺伝子をクローニングし、培養細胞において発現させた。その主な局在は核に認められたが、核移行シグナル（NLS)を欠損したNeu4変異体においてはその核局在が完全に消失した。また、インポーチンβ阻害剤処理でもNeu4の核局在が有意に低下したことから、Neu4/インポーチンの相互作用が核局在を制御していることが確認された。しかしその一方で、他の魚類Neu4にもNLSを有するものが存在する。これらNeu4は核に局在を示さないことから、核局在にはNLS以外の因子の関与が予想される。そこでAlphafold2による立体構造予想を行い、魚種間でNeu4を比較したところ、NLS以外に1か所、構造類似性が低い箇所（Less conserved region, LCR)があることがわかった。この変異体を欠損させたメキシカンテトラNeu4は核局在の割合が低下し、同じく核局在を示すスズキ目Neu4においてもLCR欠損により同様の傾向が得られた。しかしこのLCRそのものは核局在を示さない魚類Neu4にも存在する。そこでLCRのアミノ酸配列を比較したところ、カラシン目やスズキ目Neu4のLCRにはSer/Thrが豊富な領域がある事が見いだされ、他の魚類Neu4では認められなかった。そこでこのSer/Thrを他のアミノ酸に置換したところ、Neu4の核局在が有意に低下した。さらにこのSer/Thrを欠損した変異体も同様の細胞内局在を示した。これらの結果から、スズキ目およびカラシン目のNeu4のみが核局在を示す理由として、LCRに含まれる連続的なSer/Thrが重要であることが明らかとなった。

In that year, the nuclear bureau is in the center of the type シアリダーゼNeu4.カラシン鱼であるメキシカンテトラからNeu4 伝子をクローニングし, cultured cells において発成させた.その Main Bureau is in は Core に recognized められたが, Nuclear Shift シグナル (NLS) を Lack of Loss した Neu4 変 variant においてはその Nuclear Bureau is in がに completely disappeared した.また、インポーチンβ-blocking agent processing でもNeu4のNUCLEAR bureau is in が intentional に low したことから, Neu4/Neu4/インポーチンの interactive nuclear bureau confirmed in をcontrol していることがされた.しかしその Party で、 His fish Neu4にもNLSを有するものが existenceする.これらNeu4はNUclear Bureau is in the をshow さないことから, and the NUCLEAR Bureau is in the にはNLS other than the factor のrelated and がyu want to be される.そこでAlphafold2によるThree-dimensional structure predictionを行い、Neu4をcomparison between fish speciesしたところ、NLS other than NLSに1か、Structural similarity いlow (Less conserved region, LCR)があることがわかった.この変different body を无码させたメキシカンテトラNeu4はNUCLEAR bureau in のcut合が下し、同じくThe Bureau of Nuclear Weapons has shown that the Neu4 LCR system is in good condition.しかしこのLCRそのものはNUclear Bureau is showing さない鱼neu4にもexistent する.そこでLCRのアミノacid compatibility comparisonしたところ、カラシン目やスズキME Neu4のLCRにはSer/Thrが豊富な区がある事が见いだされ、他の鱼Neu4ではcognizeめられなかった.そこでこのSer/Thrをhis のアミノAcid に Replacement したところ, Neu4 のNUCLEAR bureau in が intentional にlower した.さらにこのSer/Thrを无码した変Allogeneic も Same 様の localization in the cell shows した.これらのRESULTSから、スズキ目およびカラシン目のNeu4のみが The reason why the nuclear bureau is showing in をすとして, LCR にまれる连続's なSer/Thrがimportant であることが明らかとなった.