Analysis of the mechanism for maintaining the dormancy of primordial follicles due to physical stress (compression).

これまでに圧縮に反応して転写因子FOXO3が卵母細胞内で局在を変化させていることを見出していた。FOXO3はリン酸化されることにより核内から細胞質へと移行することが知られていることから、圧縮圧力は卵母細胞内でFOXO3がリン酸化される過程で何らかの生化学的な干渉をしていると考えられる。卵母細胞におけるFOXO3のリン酸化は顆粒膜細胞で産生されるSCFに卵母細胞の膜受容体のcKitが反応し、下流のPI3K-AKTによるリン酸化カスケードによりもたらされる。そこで、まずそれらのシグナル経路に関してリガンドや阻害剤を用いて圧縮圧力への反応性の違いとして作用点の限定を試みた。具体的には圧力培養条件下でFOXO3の局在を指標にしてSCFとその阻害（ACK2）、PI3K阻害剤（Ly294002）、PTEN阻害剤（bpV）の作用を検討した。その結果SCFによるFOXO3の核外移行の作用は圧力によって抑制できるもののPTEN阻害剤によるFOXO3の核外移行の作用は圧力によって抑制できないことが明らかとなった。次にcKitのPI3Kの結合部位でありFOXO3のリン酸化に重要な719番目のチロシン残基リン酸化についてウエスタンブロットによって解析したところSCFによって誘導される719番目のチロシン残基リン酸化は圧力によって抑制されることが明らかとなった。このように圧力によってcKitのリン酸化が調節されていることを明らかにした。

これまでに圧縮に反応して転写因子FOXO3が卵母細胞内で局在を変化させていることを見出していた。FOXO3はリン酸化されることにより核内から細胞質へと移行することが知られていることから、圧縮圧力は卵母細胞内でFOXO3がリン酸化される過程で何らかの生化学的な干渉をしていると考えられる。卵母細胞におけるFOXO3のリン酸化は顆粒膜細胞で産生されるSCFに卵母細胞の膜受容体のcKitが反応し、下流のPI3K-AKTによるリン酸化カスケードによりもたらされる。そこで、まずそれらのシグナル経路に関してリガンドや阻害剤を用いて圧縮圧力への反応性の違いとして作用点の限定を試みた。具体的には圧力培養条件下でFOXO3の局在を指標にしてSCFとその阻害（ACK2）、PI3K阻害剤（Ly294002）、PTEN阻害剤（bpV）の作用を検討した。その結果SCFによるFOXO3の核外移行の作用は圧力によって抑制できるもののPTEN阻害剤によるFOXO3の核外移行の作用は圧力によって抑制できないことが明らかとなった。次にcKitのPI3Kの結合部位でありFOXO3のリン酸化に重要な719番目のチロシン残基リン酸化についてウエスタンブロットによって解析したところSCFによって誘導される719番目のチロシン残基リン酸化は圧力によって抑制されることが明らかとなった。このように圧力によってcKitのリン酸化が調節されていることを明らかにした。