Spectroscopic analysis of phase-separated liquid droplets made from low-complexity sequences

加藤グループは、FUS LCDの野生体とALS変異体deltaS57、deltaG174G175を精製し、塩やバッファー成分を含まない濃縮溶液条件から、他のグループの測定条件に最適なバッファー条件下で、温度降下によって相分離液滴を形成させる条件検討し、その系を確立した。そしてそのサンプルを各グループに提供した。中川グループは、加藤グループから提供された、36℃から5℃に温度を下げると相分離をするFUS LCD試料について、日本原子力研究開発機構のJRR-3原子炉に設置されてある中性子小角散乱装置で測定を行った。その結果、液滴形成により野生型では慣性半径が変化する一方で、変異体では変化しない傾向が見られた。今後はシグナルの精度を上げるため、試料の濃度を上げることで再度実験を実施する予定である。藤井グループでは、溶液試料の温度を室温から10℃程度に降温することで、液液相分離を示すFUS LCD試料について、放射光VUV-CDスペクトルの測定を継続して行っている。これまでに温度変化によるCDスペクトル強度の変化を観測したものの、相分離に伴う構造変化によるものかどうかについては判明していない。今後は試料純度の向上を目指したうえでCDスペクトルの測定を実施する予定である。中林グループでは、ラマンおよび自家蛍光顕微鏡を用いたラベルフリーでの液滴構造解析を検討した。ラマンイメージングについては、FUS LCDおよびその変異体、さらにFUS全長の単一液滴状態でのラマン測定に成功した。温度コントロールによって作成したFUS LCの液滴は、変異によるラマンスペクトルの変化は観測されず、液滴内のタンパク質の二次構造に顕著な違いが無いことがわかった。自家蛍光については、紫外励起自家蛍光寿命顕微鏡を製作し、FUS LCD内のチロシンを用いて自家蛍光寿命および異方性測定が行えることを確認した。

加藤グループは、FUS LCDの野生体とALS変異体deltaS57、deltaG174G175を精製し、塩やバッファー成分を含まない濃縮溶液条件から、他のグループの測定条件に最適なバッファー条件下で、温度降下によって相分離液滴を形成させる条件検討し、その系を確立した。そしてそのサンプルを各グループに提供した。中川グループは、加藤グループから提供された、36℃から5℃に温度を下げると相分離をするFUS LCD試料について、日本原子力研究開発機構のJRR-3原子炉に設置されてある中性子小角散乱装置で測定を行った。その結果、液滴形成により野生型では慣性半径が変化する一方で、変異体では変化しない傾向が見られた。今後はシグナルの精度を上げるため、試料の濃度を上げることで再度実験を実施する予定である。藤井グループでは、溶液試料の温度を室温から10℃程度に降温することで、液液相分離を示すFUS LCD試料について、放射光VUV-CDスペクトルの測定を継続して行っている。これまでに温度変化によるCDスペクトル強度の変化を観測したものの、相分離に伴う構造変化によるものかどうかについては判明していない。今後は試料純度の向上を目指したうえでCDスペクトルの測定を実施する予定である。中林グループでは、ラマンおよび自家蛍光顕微鏡を用いたラベルフリーでの液滴構造解析を検討した。ラマンイメージングについては、FUS LCDおよびその変異体、さらにFUS全長の単一液滴状態でのラマン測定に成功した。温度コントロールによって作成したFUS LCの液滴は、変異によるラマンスペクトルの変化は観測されず、液滴内のタンパク質の二次構造に顕著な違いが無いことがわかった。自家蛍光については、紫外励起自家蛍光寿命顕微鏡を製作し、FUS LCD内のチロシンを用いて自家蛍光寿命および異方性測定が行えることを確認した。