膵癌における反復配列RNAの機能解析と治療選択最適化への応用

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通常の解析では解析対象から外されることの多い反復配列RNAと呼ばれる特徴的な配列を持つnon-coding RNAが 膵癌で高発現しており、それを血中で高感度に検出可能にする方法（TRAP-digital PCR法）を考案して癌スクリーニングでの有用性を見いだした。本年は、その新たな展開として、ヒト膵発癌過程の早期から異常発現してくる反復配列RNAのひとつであるHSTII-RNAについて、癌化プロセスにおける生物学的な機能を解析することとした。HSATII RNAを発現するコンストラクト（基本となる配列を3つ連結したもの）をヒト不死化膵管上皮細胞に発現させ、a) RNA sequencing による遺伝子発現変化、b) 細胞内シグナル伝達機構の活性化状態の変化、c) HSATII RNAに結合する蛋白の同定、を中心としてHSATII RNA発現がもたらす機能変化を解析する予定として、特にRNA IP と質量分析によって同定したHSATII RNAと結合する蛋白に、Smc6蛋白 に着目した。Smc6蛋白はSmc5蛋白らと複合体を作り染色体安定性や相同組み換え修復に寄与するが、HSATII RNAの細胞内局在は細胞質が主体のため、細胞癌化の観点からは「RNAによるDNA修復蛋白の細胞質での捕捉が 遺伝子変異蓄積を惹起する」と考え、「遺伝子変異の惹起」とリンクする現象について注目した解析を進めている。実際に、HSATII RNA発現細胞ではDNA障害のマーカーであるgH2AXの発現が核内で増えていることも確認した。反復配列を持つRNAの研究は近年少しずつ散見されてきたが、シークエンスの反復性のために扱いにくい研究対象であることは変わらない。HSATII RNAに関しては、「CTCFの機能を変化させ慢性炎症を惹起する」ことが報告されたが、我々の検討結果とは相違点もあり、さらなる研究が必要と考えている。