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ゾウリムシ大核内共生因子の研究

草履虫大核共生因子的研究

基本信息

批准号：
03269220
负责人：
月井雄二
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Hosei University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-03269220/
关键词：
Paramecium inclusion body ultrastructure endosymbiosis endosymbiont macronucleus

项目摘要

1.細胞分画による封入体構成繊維の分離-80度で保存した細胞を2倍量のBuffer(0.01M Tris HCl,pH7.5,0.15M NaCl,0.01M KCl) glass homogenizerでホモジナイズした後,8000rpm×20'を2回行ない、その沈澱を同じBufferにsuspendした。これをショ糖不連続濃度勾配遠心にかけ(30000rpm×80'、Hitachi;80Pー7,RPSー65)30の分画を得た。その全てを電顕でチェックした結果、30%ショ糖濃度の上2〜3画分に繊維がみられた。これを集めBufferで希釈して、4000rpm×80'の遠心を行ないその沈澱をさらに同じBufferにsuspendしたものをEMで観察したところ、繊維の長とは様々だが、太さは22〜26nmで生細胞で観察された封入体構成繊維の太さとほぼ一致した。現在は得られた蛋白質のSDSーPAGEを試みており、すでに得られている単離封入体のSDSーPAGEの結果とー致するかを検討中である。(東京都臨床医学総合研究所、矢崎和盛氏との共同研究による)2.封入体を大量に保持するゾウリムシ系統の作出以前から封入体をもつNn4a株のsublines作りを続けてきたが、その際、できるだけ封入体の少ないものと、逆により多く含むsublinesを作るよう心がけてきた。前者は封入体単離などの際のback groundないしはcーontrolとして利用できるし、後者は、封入体単離をより容易にしてくれる可能性がある。これまでに後者の傾向を強く示すもの、すなわち、もとの株よりも大きな封入体を含むsublinesを得ることができた。このことは、封入体が増殖の過程で変異したのか、それとも宿主細胞の側が変わったのかのいずれかを意味するわけだが、それについても検討中である。

1. Cell separation and encapsulation composition were separated at-80 ° C. Cells were stored at 2 times the amount of Buffer(0.01M Tris HCl, pH 7.5, 0.15M NaCl, 0.01M KCl) glass homogenizer. After separation, the cells were suspend at 8000rpm×20'in 2 cycles. The concentration of sugar in the mixture was determined by a distance measurement (30000rpm× 80', Hitachi;80P-7,RPS 65). The results of the whole process are as follows: 30% glucose concentration is 2 ~ 3 minutes higher than that of the control group. The buffer is suspended at 4000rpm and the precipitate is suspended at 80 nm. The buffer is suspended at 22 ~ 26 nm and the precipitate is suspended at 22 ~ 26nm. Now we have SDS PAGE results for isolated proteins. (Joint research conducted by Tokyo Institute of Clinical Medicine, Yazaki and Sheng)2. Encapsulation mass preservation of the system and the previous generation of encapsulation Nn4a strain of sublines The former is the back ground of the enclosure and the latter is the possibility of the enclosure being separated easily. The latter tendency is strong, and the latter tendency is strong. The process of cloning and cloning of the host cell is different.