tRNAとaaRSの複合体形成の初期過程としてアンチコドンの識別機構の重要性

反密码子识别机制作为 tRNA 和 aaRS 复合物形成初始过程的重要性

• 批准号: 05265209
• 负责人: 今野 美智子
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Ochanomizu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-05265209/
• 关键词: メチオニルtRNA合成酵素; Thermus themophilus; X線結晶構造解析

今回解析した蛋白質は、Thermus themophilus由来メチオニンRS(Met-RS)のC末端二量体形成ドメインを欠いた503アミノ酸残基からなる。PEG6000を沈殿剤としてhanging drop蒸気拡散法及び種結晶法により約0.2x0.2x0.5mmの結晶を得た。結晶は、斜方晶系、空間群P2_12_12_1,a=82.75(3),b=117.42(4),c=57.15(3)A,Z=4,D_<obs>=1.22gcm^<-3>,V_m=2.37 A^3dalton^<-1>,V_<sol>=48.1%で非対称単位に1個分子が存在する。母結晶を10mM K_2PtCl_4溶液に8日間、1.25mM CH_3CO_2HgC_6H_4NH_2溶液に2日間、2mM Sm(Ac)_3溶液に2日間、2mM Na_2PdCl_4溶液に2日間浸し、4種類の重原子誘導体を得た。反射強度データは、高エネルギー物理学研究所の放射光をX線源として1.0、0.91Aの波長で巨大ワイセンベルグカメラを用い測定し、母結晶と重原子誘導体結晶のデータ解析をPROTEIN及びCCP4プログラムで進めた。母結晶は、3軸の周囲、2.2A分解能で158059個の反射が観測でき、独立反射25544個を得、Rmerge=9.5%であった。3.5A分解能の反射で多重同型置換法により重原子位置の精密化を行い、7178個の反射に対しfigure of meritは0.61に達した。3.5A分解能の電子密度図で、分子と溶媒の明瞭な境界線から、84x40x34Aの細長い形をした分子を同定した。更に、N末端のヌクレオチド結合ドメインのβストランド及びtRNA結合サブドメインに存在するαヘリックスを特定した。現在、Thermus themophilusのtRNA^<Met>の精製を進めており、更に、野生型Met-RSとtRNA^<Met>の複合体の構造解析を行う予定である。

This paper analyzes the origin of Thermus themophilus, RS(Met-RS) and its C-terminal dimer formation, and analyzes the structure of Thermus themophilus. PEG6000 was obtained by hanging drop evaporation and crystallization methods with a diameter of about 0.2x0.2x0.5mm. Crystallization is orthorhombic, space group P2_12_12_1, a =82.75(3),b=117.42(4),c=57.15(3)A,Z= 4, D_<obs>=1.22gcm^<-3>,V_m=2.37 A^3dalton^<-1>,V_<sol>=48.1%; The parent crystals were immersed in 10mM K_2PtCl_4 solution for 8 days, 1.25 mM CH_3CO_2HgC_6H_4NH_2 solution for 2 days, 2mM Sm(Ac)_3 solution for 2 days, 2mM Na_2PdCl_4 solution for 2 days, and 4 kinds of heavy atom inducers were obtained. Reflectance intensity measurement of X-ray source at wavelength of 1.0 and 0.91 A at Institute of Physics, parent crystal, heavy atom inducer crystal, PROTEIN and CCP4. Mother crystal, 3-axis rotation, 2.2A decomposition energy of 158059 reflections, independent reflections of 25544, Rmerge=9.5% 3.5A resolution energy reflection multiple isotype substitution method for precision of heavy atom position, 7178 reflection figure of merit 0.61 3.5A decomposition energy electron density, molecular and solvent light boundary line, 84 x 40 x 34 A thin middle shape, molecular and constant. In addition, the N-terminal region of the protein binding site is characterized by the presence of a protein binding site and a protein binding site Now, Thermus themophilus tRNA ^<Met>purification progress, more, wild-type Met-RS tRNA^<Met>complex structure analysis is scheduled.