時間分解顕微蛍光法によるトランスミッタ-放出機構の解析

本研究はジアシルグリセロ-ル(DG)が、膜融合にどの様に関与するかを明らかにする目的で、時間分解顕微蛍光法を用いて以下の実験を行った。リポソ-ムはホスファチジルコリン(PC):ホスファチジルエタノ-ルアミン(PE):コレステロ-ル=1:1:1(mol/mol)で構成されるmulti lamellar vesicle(MLV)を用いた。先ず、蛍光リン脂質のNBDーPEを含むMLVの蛍光強度の温度変化を検討すると、脂質二重層からヘキサゴナル相への移行は、2.5mol%ジオレオイルグリセロ-ル(DOG)を含むMLVで約30℃から見られ、DOGの濃度依存性に移行温度の低下と移行速の上昇が認められた。次に、蛍光プロ-ブDPHを側鎖の一つに持つPC(DPHーPC)、あるいはDPHーPCをホスホリパ-ゼCで水解して調製したDPHーDGを含んだMLV内のDPHの分子運動をピコ秒パルスレ-ザ-を用いて解析した。2.5mol%のDOGを含んだMLV内のDPHの運動速度とその範囲は、同一温度下では常にDPHーDGの方がDPHーPCより大きく、また温度によるその増大率もDPHーDGの方がDPHーPCより大きかった。一方。37℃におけるDOG存在下でのDPHの運動性の変化は、DPHーDGでは5mol%以上で、DPHーPCでは 10mol%以上で認められた。また、DPHーDGではDOGの濃度に依存して蛍光寿が短縮したが、DPHーPCではその様な現象は見られなかった。以上の結果より、生体膜における脂質二重層からヘキサゴナル相への移行が小量のDGにより誘導されることが示唆された。

本研究はジアシルグリセロ-ル(DG)が、膜融合にどの様に関与するかを明らかにする目的で、時間分解顕微蛍光法を用いて以下の実験を行った。リポソ-ムはホスファチジルコリン(PC):ホスファチジルエタノ-ルアミン(PE):コレステロ-ル=1:1:1(mol/mol)で構成されるmulti lamellar vesicle(MLV)を用いた。先ず、蛍光リン脂質のNBDーPEを含むMLVの蛍光強度の温度変化を検討すると、脂質二重層からヘキサゴナル相への移行は、2.5mol%ジオレオイルグリセロ-ル(DOG)を含むMLVで約30℃から見られ、DOGの濃度依存性に移行温度の低下と移行速の上昇が認められた。次に、蛍光プロ-ブDPHを側鎖の一つに持つPC(DPHーPC)、あるいはDPHーPCをホスホリパ-ゼCで水解して調製したDPHーDGを含んだMLV内のDPHの分子運動をピコ秒パルスレ-ザ-を用いて解析した。2.5mol%のDOGを含んだMLV内のDPHの運動速度とその範囲は、同一温度下では常にDPHーDGの方がDPHーPCより大きく、また温度によるその増大率もDPHーDGの方がDPHーPCより大きかった。一方。37℃におけるDOG存在下でのDPHの運動性の変化は、DPHーDGでは5mol%以上で、DPHーPCでは 10mol%以上で認められた。また、DPHーDGではDOGの濃度に依存して蛍光寿が短縮したが、DPHーPCではその様な現象は見られなかった。以上の結果より、生体膜における脂質二重層からヘキサゴナル相への移行が小量のDGにより誘導されることが示唆された。