サイクリンD、Cdk4による細胞周期制御機構の解析

cyclin D和Cdk4细胞周期调控机制分析

• 批准号: 06281208
• 负责人: 松七五三 仁
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06281208/
• 关键词: サイクリンD; Cdk4; Cdk活性化蛋白リン酸化酵素; waf1; cip1; Kip1; 接触阻止

1.p21^<waf1/cip1>によるサイクリンDとCdk4複合体酵素阻害p21^<waf1/cip1>のサイクリンDとCdk4複合体酵素阻害作用を生化学的に解析する目的で、マウスwaf1/cip1遺伝子のcDNAを単離し、大腸菌と昆虫細胞に発現させた。精製したp21^<waf1/cip1>を用いて結合実験を行なったところ、p21^<waf1/cip1>はサイクリンDあるいはCdk4それぞれ単独ではなくて、それらの複合体と結合した。また、1分子のp21^<waf1/cip1>が結合しただけではサイクリンDとCdk4複合体酵素の阻害作用を示さないが、複数の分子が結合してはじめて阻害作用を示すことが明かとなった。2.哺乳動物のCdk活性化蛋白リン酸化酵素(CAK)の単離と解析マウスCAK遺伝子のcDNAを単離し、この遺伝子産物のC末端を認識する抗体を作製した。この抗体は、マウスやラットのCAK活性を測定することができる。一方、ラット線維芽細胞株における接触阻止では、サイクリンDとCdk4の複合体形成はみられるものの、複合体酵素活性はみられない。これについて解析したところ、接触阻止でもCAKは活性化しているが、Cdk4のスレオニン残基はリン酸化されていなかった。そして接触阻止では、p27^<kip1>が多量に存在することで、CAKがCdk4を基質として認識することを阻害し、結果としてサイクリンDとCdk4複合体酵素の活性化を阻害していることが明かとなった。

1. P21 ^ < waf1 / cip1 > に よ る サ イ ク リ ン D と Cdk4 complex enzyme inhibitor against p21 ^ < waf1 / cip1 > の サ イ ク リ ン D と Cdk4 complex enzyme inhibitor against role を に of biochemistry analytic す る purpose で, マ ウ ス waf1 / cip1 heritage 伝 son の cDNA を 単 し, coliform と insects Cell に occurs させた. Refined し た p21 ^ < waf1 / cip1 > を with い て combination be 験 を line な っ た と こ ろ, p21 ^ < waf1 / cip1 > は サ イ ク リ ン D あ る い は Cdk4 そ れ ぞ れ 単 alone で は な く て, そ れ ら の complex と combining し た. ま た, 1 molecular の p21 ^ < waf1 / cip1 > が combining し た だ け で は サ イ ク リ ン D と Cdk4 complex enzyme を の resistance against role さ な い が, plural の molecular が combining し て は じ め を て resistance against role す こ と が Ming か と な っ た. 2. Mammals の Cdk activation protein リ ン acidification enzyme (CAK) の 単 from と parsing マ ウ ス CAK posthumous son 伝 の cDNA を 単 し, こ の heritage 伝 zi chan content の C terminal を know す る antibody を cropping し た. Determination of <s:1> <s:1> antibody and を ウスやラット <s:1> CAK activity を する する とがで る る る る. One party, ラ ッ ト line D bud cell lines に お け る contact stop で は, サ イ ク リ ン D と Cdk4 の complex formation は み ら れ る も の の, complex enzyme activity は み ら れ な い. Analytical し こ れ に つ い て た と こ ろ, contact block で も CAK は activeness し て い る が, Cdk4 の ス レ オ ニ ン residues は リ ン acidification さ れ て い な か っ た. Stop そ し て contact で は, p27 ^ < kip1 > が に exist abundant す る こ と で, CAK が Cdk4 を matrix と し て know す る こ と を resistance against し, results と し て サ イ ク リ ン D と Cdk4 の complex enzyme activeness を resistance against し て い る こ と が Ming か と な っ た.