軟骨由来増殖制御因子コンドロモジュリン-Iの血管新生阻害活性と骨形成の制御

软骨源性生长调节剂软骨调节蛋白-I的血管生成抑制活性和骨形成调节

基本信息

批准号：
07273239
负责人：
鈴木不二男
金额：
$ 2.56万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は、ウシ胎仔軟骨の抽出物が培養軟骨細胞のプロテオグリカン合成を促進すると同時に、この抽出物とbFGFを共存させると軟骨細胞の増殖を相乗的に促進することを明らかにして、この活性成分の完全精製を行い、コンドロモジュリン-I(ChM-1)と命名した。そこで本研究では骨端軟骨およびその周囲組織におけるChM-IとbFGFの発現局在を解析して、骨端軟骨細胞の増殖、分化成熟、および血管侵入の制御機構を明らかにすることを目指した。〔^3H〕で標識したウシChM-IcDNAをプローブにしてウシ胎仔尾骨・骨端軟骨およびその周囲組織におけるChM-ImRNAの発現をin situ hybridization によって検討した結果、ChM-Iは骨端軟骨に特異的に発現し、増殖軟骨層から肥大軟骨層にかけて発現増強が認められた。これに対して血管侵入が起こる石灰化軟骨層では発現が消失していた。またChM-IのN-末端近傍のアミノ酸配列に相当する合成ペプチドに対する抗体を作成し、ウシ胎仔尾骨・骨端軟骨を材料にして免疫染色したところ、ChM-I蛋白質の組織局在はChM-ImRNAの発現と一致したパターンを示した。さらに骨誘導蛋白質であるBMPをヌードマウスの筋膜下に移植すると、その周囲に内軟骨性骨形成が起こるが、その際、ChM-IをBMPと同時に投与すると軟骨形成が著明に促進されるものの、骨形成には至らなかった。この結果はChM-Iによる血管新生阻害作用により骨への置換が抑制されたものと結論された。なお、上記の研究を遂行するために、「マイクロプレートリーダー」および超遠心機用の「固定角ローター」を利用した。

我们证明，胎牛软骨的提取物可促进培养的软骨细胞中的蛋白聚糖合成，同时与BFGF共存该提取物，可协同促进软骨细胞的增殖，并完成这种活性成分的完全纯化，并命名为Chondromodulin-i（Chm-1）。因此，在这项研究中，我们分析了CHM-I和BFGF表达在骨epi骨软骨和周围组织中的定位，旨在阐明控制外周期性软骨细胞增殖，分化成熟和血管入侵的机制。将用[^3H]标记为探针标记的牛CHM-ICDNA，通过原位杂交检查了CHM-IMRNA在coccyx，牛胎儿尾骨和周围组织的周围组织中的表达。 CHM-I在骨physeal软骨中特异性表达，并观察到从增殖软骨层到肥厚软骨层的表达增加。相比之下，表达在钙化软骨浸润发生的钙化软骨层中消失。此外，制备了与CHM-I N末端附近氨基酸序列相对应的合成肽的抗体，并使用牛胎儿尾coccyx和epiphyseal软骨作为材料进行免疫染色，并将CHM-I蛋白的组织定位与CHM-I蛋白的组织定位显示出与CHM-IMRNA表达一致的模式。此外，当BMP（一种骨诱导蛋白）被植入裸鼠的筋膜下时，周围发生了软骨骨形成，尽管与BMP同时施用CHM-I-I可以显着促进软骨形成，但不会导致骨形成。该结果得出的结论是，通过CHM-1抑制骨骼替代的血管生成抑制了新血管形成。此外，为了进行上述研究，使用了超速放射线的“微孔读取器”和“固定角度转子”。