权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

膜タンパク質の新規な再構成法の研究

膜蛋白重构新方法研究

基本信息

批准号：
08231244
负责人：
奥村幸久
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では脂質2分子膜小胞(リポソーム)と細胞との共存時に膜タンパク質が細胞膜からリポソーム構成脂質からなる膜小胞上に移行する現象を利用した,可溶化の過程を含まない新規な膜タンパク質再構成方法開発の可能性を探っている.(1)移行膜タンパク質を保持したリポソームと膜タンパク質を含まないリポソームとを固定相・移動相として用い,膜タンパク質の種類に依存した両リポソーム間における移行挙動の違いを利用したクロマトグラフィー系を構築する試みとして,まず長鎖アルキル基で化学修飾した高分子ゲル上に固定したリポソームと固定していないリポソームとから構成される系を構築し,この系においてリポソームから別のリポソームへとヒト赤血球膜タンパク質であるアセチルコリシエステラーゼが移行することを示した.さらにリポソーム脂質組成,ゲル疎水基構造などの条件が再移行に与える影響についても検討をおこなった.(2)いったんリポソーム上に再構成した機能性膜タンパク質を本来その膜タンパク質を持たない他の細胞膜に導入する試みの第1段階として,F9細胞膜上に存在する細胞-細胞間接着膜タンパク質E-カドヘリンのリポソームへの再構成を検討した.F9細胞からの移行膜タンパク質量はリポソーム構成脂質中の人工リン脂質1,2-ジミリスタミド-1,2-デオキシホスファチジルコリンの含量増加とともに多くなった.移行タンパク質のSDS-ポリアクリルアミド電気泳動,さらに抗E-カドヘリンモノクローナル抗体を用いたECL-western blotting法によりE-カドヘリンを検出し,E-カドヘリンのリポソームへの導入を示した.次に,このリポソーム上に再構成したE-カドヘリンの機能に関して検討をおこない,リポソーム上のカドヘリンがF9細胞上のカドヘリンと相互作用可能であることを示唆する結果を得た.

In this study, we explored the possibility of utilizing the phenomenon of membrane transition between lipid 2 molecule membrane vesicles and cell membrane vesicles during blueshifting, and exploring the possibility of developing a new method of membrane recombination including solubilization. (1)The transition film quality is maintained, and the transition film quality is maintained. The polymer was chemically modified by long chain reaction, and the structure of the polymer was constructed. In addition to the lipid composition, the water base structure and the conditions for re-migration are also discussed. (2)In the first stage of the experiment to introduce the functional membrane protein into other cell membranes while maintaining the original membrane protein, the remodeling of the cell-cell interface membrane protein E-protein on the F9 cell membrane was investigated. The quality of the transitional membrane protein in the F9 cell membrane was similar to that of the artificial membrane lipid 1, 2- The SDS-cluster of migration molecules was electrophoresis, and the anti-E-cluster antibody was detected by ECL-western blotting method, and the introduction of E-cluster of migration molecules was demonstrated. Second, the system reconstructs the E-tag on the F9 cell, and the interaction between the E-tag and the F9 cell is possible.