权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

体系的RNAiによる線虫C.elegansのゲノム機能解析

通过系统 RNAi 进行线虫基因组功能分析

基本信息

批准号：
14011212
负责人：
杉本亜砂子
金额：
$ 2.37万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14011212/
关键词：
遺伝学遺伝子ゲノム発生・分化細胞・組織

项目摘要

1.体系的RNAi法のさらなるハイスループット化体系的RNAiをさらに効率的に行うために、従来はマニュアルで行っていた二本鎖RNAの合成過程を自動化するための条件決定を行った。具体的には、ラボラトリーオートメーションシステム(Biomek)を用いて、96穴プレートフォーマットで非重複cDNAセットから高濃度の二本鎖RNAを合成する条件を決定した。2.体系的RNAi法による必須遺伝子の網羅的探索約10,000遺伝子由来のcDNAを含む非重複cDNAセット(国立遺伝研・小原雄治教授より供与)を鋳型として、上述の手法により二本鎖RNAを合成し、線虫を高濃度RNA溶液に浸すことによって体系的なRNAiを行った。各cDNAに対するRNAiによる表現型を実体顕微鏡で観察し、表現型を記録した。表現型としては、胚性致死・幼生致死・不稔・形態異常・運動能力異常等に着目し、表現型データベースを並行して構築した。平成12月現在で、約4500クローンについての解析を完了した。3.胚性致死遺伝子群の分類上記の体系的RNAiで胚性致死となったものについて最終表現型を微分干渉顕微鏡で観察し、発生停止時期(細胞増殖期、形態形成期、形態形成完了後、等)によって分類を行った。また、神経・筋肉・腸・咽頭等の細胞分化や組織形成についても記録した。これまでに、約120の胚性致死遺伝子についての解析を完了した。これらの表現型解析に基づき、形態形成過程に特異的に異常のあるものを選択して以後の解析を行う予定である。

1. The RNAi method of the system is to automate the synthesis process of RNA in the RNAi system. The specific conditions for the synthesis of Biomek RNA at high concentrations are determined by the use of biomek and biomek. 2. The RNAi method of the system has been used to explore the network of essential genes. About 10,000 cDNA sequences containing non-repetitive cDNA sequences (provided by Professor Yuji Ohara of the National Institute of Genetics) have been used to model RNAi. The above-mentioned methods include the synthesis of two-lock RNA and the immersion of worms in high-concentration RNA solutions. The phenotype of each cDNA was detected by microscopy. Phenotype, embryonic death, juvenile death, infertility, morphological abnormality, abnormal motor ability, etc. Heisei December now, about 4500 koku 3. The classification of embryonic lethal gene groups is recorded in the system of RNAi, embryonic lethal gene expression, final phenotype, differential stem microscopical observation, development stop period (cell growth stage, morphogenesis stage, after morphogenesis, etc.), and classification. Cell differentiation and tissue formation of nerve, muscle, intestine and pharynx are recorded. The analysis of about 120 embryonic lethal genes was completed. The phenotype analysis is based on the morphological process of specific abnormalities, and the analysis is predetermined.