がん血管を破壊する血管平滑筋選択的複製・発現ベクターの開発

开发破坏癌症血管的血管平滑肌选择性复制和表达载体

• 批准号: 14030097
• 负责人: 高橋 克仁
• 金额: $ 3.84万
• 依托单位: Research Institute, Osaka Medical Center for Cancer and Cardiovascular Disaeses
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14030097/
• 关键词: がん遺伝子治療; ヘルペスウイルス; 血管平滑筋; カルポニン; 制限増殖型ウイルス

ヒトカルポニン遺伝子の平滑筋特異的なプロモーター領域を、HSV-1ウイルスの複製開始に必須な転写因子をコードするICP4遺伝子の上流に挿入し、さらにその上流に標識遺伝子lacZを、ICP4の下流にInternal Ribosomal Entry Site (IRES)-EGFPを連結した相同組換えベクターpKX2betaG3を構築した。このDNA断片をICP4欠失HSV変異体d120のリボヌクレオチド還元酵素(RR, ICP6)の遺伝子座に相同組換え法を用いて挿入し、ICP4とRRの二重欠失変異体を作製した。さらに、VEGFシグナルを抑制する可溶性VEGF受容体sFlt-1 cDNA(東京大学医科学研究所、渋谷氏より供与)をEGFPの代りにICP4の下流に挿入し、IRESを用いて発現させるための相同組換えベクターを作成し、ICP4欠失HSV変異体d120のリボヌクレオチド還元酵素(RR, ICP6)の遺伝子座への最初の相同組換え実験を行った。一方、d12.CALPΔRRベクターをヌードマウス(♀)眼窩下静脈より2×10^7p.f.u./マウスで投与し、経時的に血液、脳、心臓、大動脈、肺、肝臓、腎臓、脾臓、卵巣、膀胱を採取した。マウス血清中の複製可能なd12.CALPΔRRベクターは24時間でほぼ消失した。また、肝、脾、肺組織から複製活性のあるd12.CALPΔRRベクターは検出されなかった。投与後4日目およびそれ以降では、これらの組織でLacZ、ICP4ともに発現は認められず、病理学的にも明らかな組織障害は認められなかった。また投与後の血液生化学検査(肝・腎機能、糖・脂質代謝機能)では、d12.CALPΔRRベクターによる異常は認められなかった。

The smooth and specific translation of the vector is carried out in the domain, HSV-1, and the required transcription factor for replication start is set up in the upstream of the ICP4 vector, and the upstream of the ICP4 vector is set up in the downstream of the ICP4 vector. Internal Ribosomal Entry Site (IRES)-EGFP is linked to the same set of components, namely, pKX2betaG3. This DNA fragment was amplified by PCR using the same method as that of the DNA fragment ICP4 and the HSV variant d120, and the PCR fragment ICP4 and the HSV variant d120 were amplified by PCR using the same method. In addition, soluble VEGF receptor sFlt-1 cDNA(supplied by the Institute of Medical Sciences, University of Tokyo, Shibuya) was produced in the downstream part of ICP4 and the same component was produced in the use of IRES. The same component was produced in the downstream part of ICP4 and the same component was produced in the initial part of the gene locus of HSV d120. One side, d12.CALPΔRR ($>) suborbital vein 2× 10^7p.f.u./ The blood, heart, arteries, lungs, liver, kidneys, spleen, eggs, and bladder are all taken. It is possible to replicate in the serum. CALP ΔRR may disappear after 24 hours. The liver, spleen and lung tissues were reactivated. 4 days after the vote, the tissue was identified as LacZ, ICP4, and the tissue was identified as abnormal. Blood biochemical tests (liver and kidney function, sugar and lipid metabolism function) were performed after administration.

项目成果

Takahashi, K., Yamamura H.: "Studies and perspectives of calponin in smooth muscle regulation and cancer gene therapy"Advances in Biophysics. 37. 91-111 (2003)

Takahashi, K., Yamamura H.：“钙调蛋白在平滑肌调节和癌症基因治疗中的研究和观点”生物物理学进展。

Ueda, T., et al.: "Frequent expression of smooth muscle markers in malignant fibrous histiocytoma of bone"Journal of Clinical Pathology. 55. 853-858 (2002)

Ueda, T. 等人：“骨恶性纤维组织细胞瘤中平滑肌标志物的频繁表达”临床病理学杂志。

Sugenoya, Y. et al.: "Smooth muscle calponin in mesangial cells : regulation of expression and a role in suppressing glomerulonephritis"Journal of American Society of Nephrology. 13. 322-331 (2002)

Sugenoya，Y.等人：“系膜细胞中的平滑肌钙调蛋白：表达调节及其在抑制肾小球肾炎中的作用”美国肾病学会杂志。

Sasaki, Y., et al.: "Expression of smooth muscle calponin in tumor vessels of human hepatocellular carcinoma and its possible association with prognosis"Cancer. 94. 1777-1786 (2002)

Sasaki, Y., et al.：“平滑肌钙调蛋白在人肝细胞癌肿瘤血管中的表达及其与预后的可能关联”癌症。

Fujishige, A. et al.: "Altered mechanical properties in smooth muscle of mice with a mutated calponin locus"Zoolological Science. 19. 167-174 (2002)

Fujishige, A. 等人：“钙调蛋白基因座突变的小鼠平滑肌的机械特性发生改变”《动物学科学》。