分泌性形態形成因子Wntファミリーのアシル化とその機能の解析

分泌型形态发生因子Wnt家族的酰化及功能分析

• 批准号: 14034221
• 负责人: 門脇 辰彦
• 金额: $ 4.35万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14034221/
• 关键词: Wntファミリー; Porcupine; 形態形成因子; タンパク質のアシル化

Wgにおいてパルミチン酸が付加されるアミノ酸残基の同定PorcはWgの83-106番アミノ酸から成るドメインに結合する。ショウジョウバエHedgehogのパルミチル化に働くSkinny hedgehogとの類似性、およびwg変異株の存在から、94番目のシステインがパルミチル化されると予想でき、このシステインをグリシンに置換したWg変異体(C94G)を作製した。野性型とC94G変異型WgをS2細胞で発現させ、^<35>S-メチオニシと^3H-パルミチン酸でラベルし、Wgタンパク質への取り込みを測定した。その結果、C94G変異体は^3H-パルミチン酸によってラベルされず、94番目のシスティンがパルミチル化されることが明らかとなった。このシステイン残基はWntファミリーメンバー内で良く保存されているので、この位置におけるパルミチル化の普遍性が推定される。Wntタンパク質の無細胞パルミチル化系の確立生細胞を^3H-パルミチン酸でラベルする方法では、Wntタンパク質への^3Hの取り込み効率が極めて低く、Porcの構造と機能の詳細な解析は困難である。そこで、無細胞パルミチル化系の確立を行なっている。内在性または細胞内で発現させたWntタンパク質は既にパルミチル化されていると考えられるので、mRNAを鋳型にした無細胞翻訳系によりWntタンパク質を合成する。翻訳と同時、または後にミクロソーム画分を添加し、Wntタンパク質への^3H-パルミチン酸の取り込みを測定する。現在までに、イヌ膵臓、マウス脳、肝臓、精巣、およびショウジョウバエ胚由来のミクロソーム画分を用いて実験を行なったが成功していない。パルミチル化され得るWntタンパク質の調製法等について、さらに検討を行なう予定である。

Wg 83-106 amino acid residues are identified by the amino acid sequence of Wg 83-106. The similarity of Skinny Hedgehog and the existence of different strains of Skinny Hedgehog are discussed in detail in this paper. Wild type C94G variant Wg S2 cells developed,^<35>S-type C94G variant Wg S2 cells developed,^S- The results showed that the C94G variant had a higher yield than that of the C94G variant, which had a higher yield than that of the C94G variant. The residue of this gene is well preserved in the genome, and the universality of this gene is presumed. The method for establishing cell-producing cells from cell-free culture system of Wnt is very difficult, but the efficiency of Wnt is very low, and the detailed analysis of structure and function of Porc is difficult. The establishment of a cell-free culture system. Intrinsic gene expression in the cell, Wnt protein synthesis in the cell, mRNA expression in the cell-free cell line. At the same time, after the completion of the test, the quality of the test solution was determined. Now, it's time for you to start working. In the case of the Wnt, the modulation method, etc., the method of the Wnt and the modulation method are determined.

项目成果

Goto A, Kadowaki T, Kitagawa Y: "Drosophila hemolectin gene is expressed in embryonic and larval hemocytes and its knock down causes bleeding defects"Dev.Biol.. 264. 582-591 (2003)

Goto A、Kadowaki T、Kitakawa Y：“果蝇血凝素基因在胚胎和幼虫血细胞中表达，其敲低会导致出血缺陷”Dev.Biol.. 264. 582-591 (2003)

笹川浩美, 門脇辰彦: "動物行動と視覚遣伝子の発現制御-ミツバチをモデルシステムにした解析-"化学と生物. 41. 359-365 (2003)

Hiromi Sasakawa、Tatsuhiko Kadowaki：“动物行为和视觉基因表达的调节 - 使用蜜蜂作为模型系统进行分析”化学与生物学 41. 359-365 (2003)。

TANAKA et al.: "Drosophila segment polarity gene product Porcupine stimulates the posttranslation N-glycosylation of Wingless in the Endoplasmic reticulum"J.Biol.Chem.. 277. 12816-12823 (2002)

TANAKA 等：“果蝇节段极性基因产物 Porcupine 刺激内质网中 Wingless 的翻译后 N-糖基化”J.Biol.Chem.. 277. 12816-12823 (2002)

YANAGAWA et al.: "Casein kinase I phosphorylates the Armadillo protein and induces its degradation in Drosophila"EMBO J.. 21. 1733-1742 (2002)

YANAGAWA 等人：“酪蛋白激酶 I 磷酸化犰狳蛋白并诱导其在果蝇中降解”EMBO J.. 21. 1733-1742 (2002)

Funada M, et al.: "Characterization of the two distinct subtypes of metabotropic glutamate receptors from honeybee, Apis mellifera"Neurosci.Lett.. (印刷中). (2004)

Funada M 等人：“来自蜜蜂、Apis mellifera 的代谢型谷氨酸受体的两种不同亚型的特征”Neurosci.Lett..（出版中）。