リボソームの100S?70S変換―定常期における蛋白合成制御機構の研究―

核糖体100S到70S的转换 - 固定相蛋白质合成控制机制的研究 -

• 批准号: 14035250
• 负责人: 和田 明
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Osaka Medical College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14035250/
• 关键词: リボソーム; 翻訳; 100Sリボソーム; 二価性試薬; フットプリンテイング; cryo電子顕微鏡

研究計画に基づいて、以下の研究を行った。1.100Sリボソームを形成する蛋白質、RMF(ribosome modulation factor)のリボソーム結合位置の決定。昨年度から二価性試薬2-イミノチオレーンを用いて100Sに結合したHis-taggedRMFと架橋されるリボソーム蛋白の同定に取り組み、L2,L13およびS13が架橋されることを見出した。この結果は1.RMFが50Sと30Sのインターフェースにあること、2.ペプチジルセンターがL2とL13の中間の領域にあることからRMFはペプチジルセンター(PTC)に覆い被さっていることを示唆した。この結合位置は100SがPTCの翻訳活性を休止した状態であることとよく符合する。つぎに、RNA修飾試薬DMSを用いてRMFが結合した100Sと、結合しない70Sの修飾をfoot printingによって比較し、PTC領域からL13にかけてRMFによる修飾阻害がおこることを見出した。これは架橋反応の結果とよく一致している。2.cryo電子顕微鏡による100Sの立体構造解析38個の100Sの電顕像から長軸の周りに回転させた平均イメージをとり、100Sが50S・30S・30S・50Sの構造をとることを確定することができた。しかしその後、他の研究機関のcryo電子顕微鏡を操作する共同研究者が事実上実験できない状況に陥ったため、これ以上協力関係を維持できなくなった。そのため最近、京大・理の藤吉好則教授と新たに協力関係を結び、cryo電子顕微鏡による研究を再発足させた。この遅れを取り戻すべく努力したい。

The research project is based on the following research projects. 1. Determination of binding sites of protein and ribosome modulation factor (RMF) in the formation of 100S protein. In the past year, the two sex test groups 2- 3 were used in the middle of 100S, His-tagged RMF was used in the middle of 100S, and His-tagged RMF was used in the middle of 100S. In the middle of 100S, His-tagged RMF was used in the middle of 100S. The results are as follows: 1. RMF: 50S: 30S: 30S The combination position is 100S, and the PTC activity is at rest. RMF is used to bind to DMS, RMF is used to DMS, RMF is used to bind to DMS, RMF is used to DMS, RMF is used to bind to DMS, RMF The result of this bridge is consistent. 2. Cryo electron micro-mirror 38 100S electron microscope image analysis, 100S to 50S·30S·30S·50S structure analysis The co-investigators of cryo electron microscopes operated by other research institutions maintained a cooperative relationship between the two. Recently, Professor Yoshinori Fujiyoshi of Kyoto University has made a new research on the relationship between CRYO-electron microscopy and computer science. This is the first time I've ever tried to get a job.

项目成果

Keita Miyoshi, Rota Tsujii, Hideji Yoshida, Yasushi Maki, Akira Wada, Yasushi Matsui, Akio Toh-e, Keiko Mizuta: "Normal Assembly of 60S ribosomal subunits is required for the signaling in response to a secretory defect in Saccharomyces cerevisiae"J. Biol.

Keita Miyoshi、Rota Tsujii、Hideji Yoshida、Yasushi Maki、Akira Wada、Yasushi Matsui、Akio Toh-e、Keiko Mizuta：“60S 核糖体亚基的正常组装是响应酿酒酵母分泌缺陷的信号传导所必需的”J.

Hideji Yoshida, Yasushi Maki, Hisako Kato, Hisao Fujisawa, Kaori Izutsu, Chieko Wada, Akira Wada: "The ribosome modulation factor (RMF) binding siteon the ribosome of Escherichia coli"J. Biochemistry,. 132. 983-989 (2002)

Hideji Yoshida、Yasushi Maki、Hisako Kato、Hisao Fujisawa、Kaori Izutsu、Chieko Wada、Akira Wada：“大肠杆菌核糖体上的核糖体调节因子 (RMF) 结合位点”J.

Akira Katayama, Atsuko Tsujii, Akira Wada, T Nishio, Akira Ishihama: "Systematic search for zinc-binding proteins in Escherichia coli"Eur. J. Biochemistry. 269・9. 2403-2413 (2002)

Akira Katayama、Atsuko Tsujii、Akira Wada、T Nishio、Akira Ishihama：“大肠杆菌中锌结合蛋白的系统搜索”J. Biochemistry 269・9。