アストロサイトにおける代謝型GABA_B受容体の発現とGABA輸送体との機能的連関

星形胶质细胞中代谢型GABA_B受体的表达及其与GABA转运蛋白的功能关系

• 批准号: 16047229
• 负责人: 藤田 卓也
• 金额: $ 4.61万
• 依托单位: Kyoto Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16047229/
• 关键词: 代謝型GABA_B受容体; GABAトランスポーター; ラット大脳皮質アストロサイト; 初代培養; RT-PCR; Zn^<2+>; adenylylcyclase

2年研究の最終年度となる本年度は、ラット大脳皮質アストロサイト初代培養細胞に発現するGABAトランスポーターの新規輸送活性調節機構を中心に検討を進めた。本申請者が用いたラットアストロサイト初代培養の系では主としてGAT2が発現していることが確認された。輸送の親和性を示すK_t値は9.3±2.8μM、capacityを示すV_<max>値は0.12±0.01nmol/mg protein/minであった。これらの結果は、GABA transporter (GAT1-3)各々のに対する選択的な阻害剤を用いた検討結果からも支持されるとともに、Western blottingや免疫組織染色によっても確認できた。また、非常に興味深いことにラットアストロサイトでのGABAの輸送はZn^<2+>によって濃度依存的に阻害され、そのK_i値は5.6±1.7μMであった。さらにこの初代培養細胞より調製した細胞膜画分を用いて、GABA_B受容体の機能解析を行った。ラットアストロサイトにおいては、これまで9種のisoformsが報告されているadenylylcyclase (AC1-9)のうちAC1とAC8を除く7種のACが発現していることがRT-PCRにより示され、抑制性Giタンパク質とcoupleしているAC5とAC6の機能的な発現も1μM forskolinで上昇したcAMPの生成が、GABA_B受容体のagonistであるbaclofenにより濃度依存的に抑制されたことから明らかとなった。この抑制は、GABA_B受容体の選択的なantagonistにより濃度依存的にreverseされた。さらに、RT-PCRおよびWestern blotting、蛍光免疫染色によってもラット大脳皮質アストロサイトにGABA_B受容体が発現していることが確認でき、これまで機能的にはほとんど報告がなされていなかったアストロサイトでのGABA_B受容体の発現を明らかに出来た。

2 years study の final annual と な る は this year, ラ ッ ト big 脳 cortex ア ス ト ロ サ イ ト original culture cell に 発 now す る GABA ト ラ ン ス ポ ー タ ー の new rules transportation activity regulating mechanism を center に beg を 検 into め た. This applicant が い た ラ ッ ト ア ス ト ロ サ イ ト original culture の is で は main と し て GAT2 が 発 now し て い る こ と が confirm さ れ た. Conveying の affinity を shown す K_t numerical は 9.3 + / - 2.8 mu M and capacity を shown す V_ (Max > nt は 0.12 + / - 0.01 nmol/mg protein/min で あ っ た. こ れ ら の results は, GABA from (GAT1-3) various 々 の に す seaborne る sentaku な resistance against tonic を い た 検 for results か ら も support さ れ る と と も に, Western blotting や immunohistochemical staining に よ っ て も confirm で き た. Interests deep い ま た, very に こ と に ラ ッ ト ア ス ト ロ サ イ ト で の GABA の conveying は zinc ^ 2 + < > に よ っ て concentration dependent に resistance against さ れ, そ の K_i numerical は 5.6 + / - 1.7 mu M で あ っ た. Youdaoplaceholder0 った よ よ the first-generation cultured cells よ よ modulate the <s:1> た cell membrane for division を use て て and GABA_B receptor <s:1> function analysis を line った. ラ ッ ト ア ス ト ロ サ イ ト に お い て は, こ れ ま で nine の isoforms が report さ れ て い る adenylylcyclase (AC1-9) の う ち AC1 と AC8 を except く seven の AC が 発 now し て い る こ と が rt-pcr に よ り shown さ れ, inhibitory Gi タ ン パ ク qualitative と picking し て い る AC5 と AC6 の functionary な 発 も 1 mu M now Forskolin で rise し た cAMP の generated が, GABA_B let body の agonist で あ る baclofen に よ り concentration dependent に inhibiting さ れ た こ と か ら Ming ら か と な っ た. <s:1> <s:1> inhibits な, GABA_B acceptor <s:1> selects 択 なantagonistによ <s:1> concentration-dependent にreverseされた. Youdaoplaceholder0, RT-PCRおよびWestern Blotting, 蛍 light immune dyeing に よ っ て も ラ ッ ト big 脳 cortex ア ス ト ロ サ イ ト に GABA_B by let body が 発 now し て い る こ と が confirm で き, こ れ ま で functionary に は ほ と ん ど report が な さ れ て い な か っ た ア ス ト ロ サ イ ト で の GABA_B by let body の 発 now を Ming ら か に た.

项目成果

Transport characteristics of N-acetyl-L-aspartate in rat astrocytes:: involvement of sodium-coupled high-affinity carboxylate transporter NaC3/NaDC3-mediated transport system

• DOI: 10.1111/j.1471-4159.2005.03067.x
• 发表时间: 2005-05-01
• 期刊: JOURNAL OF NEUROCHEMISTRY
• 影响因子: 4.7
• 作者: Fujita, T;Katsukawa, H;Ganapathy, V
• 通讯作者: Ganapathy, V

Functional characterization of brain peptide transporter in rat cerebral cortex:: identification of the high-affinity type H+/peptide transporter PEPT2

• DOI: 10.1016/j.brainres.2003.10.049
• 发表时间: 2004-01-30
• 期刊: BRAIN RESEARCH
• 影响因子: 2.9
• 作者: Fujita, T;Kishida, T;Ganapathy, V
• 通讯作者: Ganapathy, V

Functional regulation of Na+‐dependent neutral amino acid transporter ASCT2 by S‐nitrosothiols and nitric oxide in Caco‐2 cells

• DOI: 10.1016/j.febslet.2005.03.065
• 发表时间: 2005-04
• 期刊: FEBS Letters
• 影响因子: 3.5
• 作者: T. Uchiyama;Yasuyuki Matsuda;Miyuki Wada;Satoru Takahashi;T. Fujita

Functional characterization of Na+-independent choline transport in primary cultures of neurons from mouse cerebral cortex

• DOI: 10.1016/j.neulet.2005.09.069
• 发表时间: 2006-01-30
• 期刊: NEUROSCIENCE LETTERS
• 影响因子: 2.5
• 作者: Fujita, T;Shimada, A;Yamamoto, A
• 通讯作者: Yamamoto, A

Functional expression and adaptive regulation of Na+-dependent neutral amino acid transporter SNAT2/ATA2 in normal human astrocytes under amino acid starved condition

氨基酸饥饿条件下正常人星形胶质细胞Na依赖性中性氨基酸转运蛋白SNAT2/ATA2的功能表达及适应性调节

• 发表时间: 2005
• 期刊: Neuroscience Letters
• 影响因子: 2.5
• 作者: Kazunari Tanaka;A. Yamamoto;T. Fujita
• 通讯作者: T. Fujita